Differential display法による歯周病原因菌遺伝子の検出

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1. 歯周ポケット内細菌のDNAマーカーの分離とDNAの解析1) 歯周ポケット細菌からの直接Diffrential display歯周ポケットから採取した細菌を直接Differential displayを行うと,安定した結果を得ることが出来なかった.2) 歯周ポケット細菌の前培養とDifferential display歯周ポケットから採取した細菌を初めにプレートに播種し増菌し,性状の異なるコロニーを単離しDifferential displayを行った.前培養,増菌という作業を加えることによって,安定した結果を得ることが出来た.3) 標準菌株のDifferential displayPorphyromonas gingivalis,Actinobacillus actinomycetemcomitans,Prevotella intermediaなどの歯周病関連細菌の標準菌株をDifferential displayを行った結果,それぞれに特徴的なパターンを表示することが可能であった.2. 歯周病病態と細菌DNAマーカー1) 歯周炎の病態として,正常,早期発症型歯周炎,成人性歯周炎の患者からポケット内細菌を採取し,前述した前培養,増菌作業を行った後にDifferential displayを行った.研究計画に前培養,増菌作業が加わったことから,Differential displayだけで病態と関連する細菌DNAマーカーを同定することは出来ない事が明らかになった.2) 歯周炎の病態が異なる,正常,早期発症型歯周炎,成人性歯周炎の患者から分離したポケット内細菌を採取し,プレートに播種し増菌し,性状の異なるコロニーを単離しDifferential displayを行った結果,病態ごとに異なる細菌をDifferential display法によってそのパターンの違いを表示することが可能なことが明らかになった.