酸素ラジカル障害によるミトコンドリアDNAの老化とその防御機構

氧自由基损伤导致的线粒体DNA老化及其防御机制

• 批准号: 08838017
• 负责人: 康 東天
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08838017/
• 关键词: ミトコンドリアDNA; 複製; DNA障害

(目的)ミトコンドリアDNAが正しく複製されることは、ミトコンドリア遺伝子の遺伝情報の維持に必須である。しかしミトコンドリアDNA複製を定量的に測定する良い系がなく、そのin vivoでの解析は困難であった。ミトコンドリアDNAの酸化的障害および自然突然変異のミトコンドリア遺伝子の遺伝情報の維持に及ぼす影響を解析するため、ミトコンドリアDNAの複製を測定する系を新たに作製した。その方法を用いてミトコンドリアDNA複製開始点を1塩基の解像度で決定することに成功した。(結果および考察)複製途中の新生鎖はその5'端が自由端になっていることを利用し、Ligation Mrdiated Polymerase Chain Reaction(LMPCR)法を用いて、新生鎖のみを増幅した。しかし、ヒトのミトコンドリアDNA複製は、その大部分が約700塩基対進んだところで停止し、放棄されてしまう。そのため、真の複製鎖と放棄された複製鎖を区別することが必要であるが、今まではその区別が非常に困難であり、さらに、複製開始点が多数あることから、複製を正しく定量することが不可能であった。LMPCR法で、真の複製鎖と放棄された複製鎖の新生鎖を独立して増幅することに成功した。増幅新生鎖をシークエンスゲルで解析し、その5'端の位置を正確に決定した。また同時に、新生鎖の量を定量した。このことから、真の複製鎖と放棄された複製鎖の新生鎖の5'端の位置が完全に一致することを明らかにし、複製の停止現象がその複製開始点に依存しないことを証明した。

(purpose) ミ ト コ ン ド リ ア DNA が is し く copy さ れ る こ と は, ミ ト コ ン ド リ ア heritage 伝 son の heritage 伝 intelligence の must maintain に で あ る. し か し ミ ト コ ン ド リ ア DNA replication を quantitative determination of に す る good い department が な く, そ の in vivo で の parsing は difficult で あ っ た. ミ ト コ ン ド リ ア DNA の acidification of the handicap of お よ び natural suddenly - different の ミ ト コ ン ド リ ア posthumous son 伝 の heritage 伝 intelligence の maintain に and ぼ す effect を resolution す る た め, ミ ト コ ン ド リ ア の DNA replication を determination す る department を new た に cropping し た. そ の way を with い て ミ ト コ ン ド リ ア DNA replication で を 1 salt base の to the starting point of the resolution decision す る こ と に successful し た. (results お よ び inspection) copy the way の new lock は そ の 5 'end が free end に な っ て い る こ と を using し, Ligation Mrdiated Polymerase Chain Reaction method (LMPCR) を with い て, new lock の み を rights of し た. し か し, ヒ ト の ミ ト コ ン ド リ ア DNA replication は, そ の most が about 700 salt base in seaborne ん だ と こ ろ で stop し, abandon さ れ て し ま う. そ の た め, true の copy lock と abandon さ れ た copy lock を difference す る こ と が necessary で あ る が, today ま で は そ の difference が very difficult に で あ り, さ ら に, copy starting point が most あ る こ と か ら, duplicate を is し く quantitative す る こ と が impossible で あ っ た. LMPCR method で, true <s:1> copy lock と abandonment された copy lock <e:1> new lock を independent て て increase する とに とに success た た. The amplitue-increasing new lock is をシ, をシ, エ, エ, スゲ, で. Analysis: the position of the 5' end <e:1> of the を and そ <s:1> is を. The correct に determines the た. Youdaoplaceholder0 at the same time に, the new lock <s:1> quantity を quantification た た. こ の こ と か ら, true の copy lock と abandon さ れ た copy locked の freshman の 5 'end の location が に completely consistent す る こ と を Ming ら か に し, duplicate の stop phenomenon が そ の copy starting point に dependent し な い こ と を prove し た.

项目成果

Miyako,K.,et al.: "The Content of Intracellular Mitochondrial DNA Decreased by 1-Methyl-4-phenylpyridinium Ion (MPP^+)" J.Biol.Chem.(in press).

Miyako,K.,et al.：“1-甲基-4-苯基吡啶鎓离子 (MPP^) 降低细胞内线粒体 DNA 的含量”J.Biol.Chem.（出版中）。

Hasegawa,E.,et al.: "A Dual Effect of 1-Methy1-4-phenylpyridinium(MPP^+)-Analogs on the Respiratory Chain of Bovine Heart Mitochondria" Archives of Biochemistry and Biophysics. 337・1. 69-74 (1997)

长谷川，E.，等人：“1-甲基1-4-苯基吡啶鎓(MPP^+)-类似物对牛心脏线粒体呼吸链的双重作用”生物化学和生物物理学档案337・1。 (1997)

Kang,D.,et al.: "Changes of Energy Metabolism Induced by 1-Methy1-4-phenylpyridinium (MPP^+)-Related Compounds in Rat Pheochromocytoma PC12 Cells" ArchIves of Biochemistry and Biophysics. 337・1. 75-80 (1997)

Kang, D. 等人：“大鼠嗜铬细胞瘤 PC12 细胞中 1-甲基 1-4-苯基吡啶 (MPP^+) 相关化合物引起的能量代谢变化”生物化学和生物物理学档案 337・1。 (1997)