サイトカインによるマスト細胞のアラキドン酸代謝の調節機構の解析

细胞因子调控肥大细胞花生四烯酸代谢机制分析

• 批准号: 08839020
• 负责人: 村上 誠
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08839020/
• 关键词: マスト細胞; サイトカイン; アラキドン酸代謝; ホスホリバーゼA_2; シクロオキシゲナーゼ; PGD_2

マスト細胞はIgEを介したアレルギー性疾患の原因となる細胞であり、その増殖、分化、成熟過程は微小環境中のサイトカインネットワークにより決定される。申請者は、マスト細胞のエフェクター機能のひとつであるアラキドン酸代謝系に焦点を当て、その分子機構について解析し、以下の点を明らかにした。【1】マウス骨髄由来培養マスト細胞(BMMC)における二相性PGD_2産生の分子機構:BMMCをIL-10とIL-1の共存下、IgE/抗原または組織性サイトカインであるc-kit ligandで活性化すると、数分以内に起こる即時型PGD_2産生に引き続いて、刺激後数時間に渡って徐々に進行する遅発型PGD_2産生が起こることを見出した。即時型応答では、常在性酵素群である細胞質ホスホリパーゼA_2(PLA_2)とシクロオキシゲナーゼ(COX)-1が、遅発型応答では新規誘導型酵素群である分泌性II型PLA_2とCOX-2が機能的に連関し、時間依存的な二相性PGD_2産生に至ることが明らかとなった。また、遅発型応答時にはPGD_2と並んで種々の炎症性サイトカイン(IL-1β、IL-6等)の産生が誘導された。【2】ラット腹腔由来成熟マスト細胞(CTMC)における二相性PGD_2産生の分子機構:BMMCで観察された二相性PGD_2産生が生体由来の成熟マスト細胞でも起こるか否かを、ラット腹腔CTMCを用いて確かめた。その結果、CTMCを神経成長因子(NGF)で刺激すると、即時応答に続いて強い遅発応答が誘導されることがわかり、実際にマスト細胞の二相性活性化が生体内で起こり得ることが強く示唆された。【3】新規マスト細胞培養法の確立:BMMCをc-kit ligand存在下線維芽細胞と共培養することにより、CTMC様の反応性を持つ新規培養マスト細胞を樹立した。本細胞はBMMCが本来応答しないG蛋白共役型のCTMC特異的刺激因子に対して応答性を獲得しており、二相性にPGD_2を産生するとともに、顆各種サイトカインを産生した。

The cause of IgE cell proliferation, differentiation and maturation in microenvironment The applicant shall focus on the analysis of the molecular mechanism of the acid metabolism system, and the following points shall be clarified. The molecular mechanism of biphasic PGD_2 production in cultured BMMC cells:BMMC IL-10 and IL-1 blue-shift, IgE/antigen activation, immediate PGD_2 production within minutes, and delayed PGD_2 production after stimulation. The immediate type of response is usually found in the cytoplasmic enzyme group, such as PLA_2 and COX-1. The immediate type of response is found in the secretory type II PLA_2 and COX-2. The function of COX-1 is related to the time-dependent biphasic PGD_2 production. The inflammatory cytokines (IL-1β, IL-6, etc.) induced by PGD_2 and PGD_2 were also detected in the inflammatory cells. 2. The molecular mechanism of biphasic PGD_2 production in CTMC:BMMC was observed in CTMC. As a result, CTMC stimulates, responds to, and induces NGF, and in vivo activates biphasic cells. [3] Establishment of new cell culture method:BMMC c-kit ligand exists under the line of cell co-culture, and CTMC is resistant to new culture method. In this cell line, we are responsible for the production of BMMC, G-protein-coactive-type CTMC-specific stimulators, and biphasic PGD_2.

项目成果

Ogasawara,T.: "Mouse bone marrow-derived mast cells undergo exocytosis,prostanoid generation and cytokine expression in response to G protein-activating polybasic compounds after coculture with fibroblasts in the presence of c-kit ligand" J.Immunol.158. 3

Ogasawara,T.：“在 c-kit 配体存在下与成纤维细胞共培养后，小鼠骨髓来源的肥大细胞会经历胞吐作用、前列腺素生成和细胞因子表达，以响应 G 蛋白激活多元化合物”J.Immunol.158。

Ashraf,M.M.D.: "Type II phospholipase A_2 is linked to cyclooxygenase-2-mediated delayed prostaglandin D_2 generation by cultured mouse mast cells following Fc RI-and cytokine-dependent activation." Biochem.Biophys.Res.Commun.229. 726-732 (1996)

Ashraf，M.M.D.：“II 型磷脂酶 A_2 与培养的小鼠肥大细胞在 Fc RI 和细胞因子依赖性激活后延迟产生前列腺素 D_2 相关。”

村上 誠: "COX-1とCOX-2の生化学と分子生物学-肥満細胞における動態" 治療学. 30. 24-28 (1996)

Makoto Murakami：“COX-1 和 COX-2 的生物化学和分子生物学 - 肥大细胞的动力学”治疗学。

Murakami,M.: "Type II secretory phsopholipase A_2 associated with cell surfaces via C-terminal heparin-binding lysine residues augments stimulus-initiated delayed prostaglandin generation." J.Biol.Chem.271. 30041-30051 (1996)

Murakami,M.：“II 型分泌性磷脂酶 A_2 通过 C 末端肝素结合赖氨酸残基与细胞表面相关，增强刺激引发的延迟前列腺素生成。”

Ashraf,M.M.D.: "Crosslinking of Fc RI induced expression of cyclooxygenase-2 and attendant delayed prostaglandin generation requiring interleukin-10 and interleukin-1β in mouse cultured mast cell" Biochem.J.320. 965-973 (1996)

Ashraf，M.M.D.：“在小鼠培养的肥大细胞中，Fc RI 的交联诱导环加氧酶 2 的表达以及随之而来的需要白细胞介素 10 和白细胞介素 1β 的前列腺素生成延迟”Biochem.J.320 (1996)。