刺激応答性逆ミセルの構築とタンパク質分離への応用

刺激响应型反胶束的构建及其在蛋白质分离中的应用

• 批准号: 09875191
• 负责人: 久保田 富生子
• 金额: --
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09875191/
• 关键词: 逆ミセル; タンパク質; 抽出; 分離; 分子集合体; バイオテクノロジー; 酵素; AOT

本研究では、新しく開発した水相pHに応答性を示す界面活性剤ジオレイルリン酸(DOLPA)からなる逆ミセルのタンパク質分離への応用に焦点を絞り研究を展開した。有機媒体中に自発的に形成される分子集合体の一種である逆ミセルは、生体高分子であるタンパク質の抽出分離操作を可能にした。逆ミセルを形成する代表的な界面活性剤としては,AOT(ジ-2-エチルヘキシルスルホコハク酸ナトリウム)が挙げられるが、本研究で開発したDOLPAは,従来抽出が困難であった分子量5万以上のタンパク質の有機相中への可溶化を可能にした。また、水相pHの変化によって、逆ミセルの形成-崩壊を制御することができた.この逆ミセルのスイッチング現象は、界面活性剤親水部のリン酸部位の酸解離によってもたらされることが、明らかとなった.逆ミセル抽出法は、従来の溶媒抽出法と同様に正抽出操作と逆抽出操作の二段階の抽出操作によって構成されるが、タンパク質などのいわゆる生理活性物質の分離操作として応用する場合、最終的に回収された溶液中における生理機能(酵素活性)の維持が大きな問題となってくる。このような観点から、回収されたタンパク質の生理活性を、いかに保持するかが工業的分離操作として利用できる鍵を握っている。本研究で開発した逆ミセル系においては、最適な条件下で抽出分離操作を行うことによって、回収したタンパク質の酵素活性がほとんど保持されていることを確認できた。

This study is aimed at exploring new ways to improve the pH responsiveness of aqueous phase and to demonstrate the interfacial activity of DOLPA (DOLPA). A kind of molecular aggregate formed by self-evolution in organic media can be extracted and separated from biological polymer. This study has discovered that DOLPA is difficult to extract from organic phase with molecular weight over 50,000 and is likely to dissolve in organic phase. The pH of the aqueous phase changes, and the formation of the reverse phase changes. The phenomenon of acid dissociation of hydrophilic part and acid site of interfacial active agent is discussed in detail. The reverse extraction method, the solvent extraction method, the two-stage extraction operation, the reverse extraction operation, the separation operation of physiologically active substances, and the maintenance of physiological functions (enzyme activities) in the solution of the final extraction method have major problems. The physiological activity of these substances is maintained and used in industrial separation operations. In this study, we found that the enzyme activity of the enzyme in the extract system was maintained under the optimal conditions.