ゲノム生物学から抽出される知識をタンパク質上に人為再構成するシステムの構築

构建将基因组生物学提取的知识人工重建到蛋白质上的系统

• 批准号: 13202069
• 负责人: 芝 清隆
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: Japanese Foundation For Cancer Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13202069/
• 关键词: 人工タンパク質; ゲノム生物学; タンパク質工学; 分子進化工学; マイクロ遺伝子; 合理的設計; 繰り返し構造; 人為再構成

ポストゲノム・プロテオーム研究から得られるゲノム知識、特にタンパク質の構造と機能に関する知識を活用するために、これらの知識を人工タンパク質上に人為的に再構成する新しい人工タンパク質創製システムを確立するのを目標とすている。既に確立しているマイクロ遺伝子重合法とマイクロ遺伝子のデザインアルゴリズム、CyberGeneを利用することにより、人為再構成の実例、使用例を蓄積していくことを目標とし、a)アコヤ貝のもつ炭酸カルシウムの結晶化に関与すると思われるモチーフをもった人工タンパク質の作製の試み、b)デザインアルゴリズムの高速化、c)無細胞翻訳系を用いた人工タンパク質の産生の試み、をおこなった。a)では、マイクロ遺伝子のデザインは完了したものの、重合体翻訳産物の精製に手間取っており、期待した機能が再構成されているかどうかの確認がとれていない。b)では、ジペプチドが内包する他の読み枠のコドンにも注目し、あらかじめ終止コドンを内包するジペプチドコドンを排除したコドン表を用いることにより、マイクロ遺伝子のデザイン時間を大幅に短縮することに成功した。この手法に関して特許を申請した。c)ではa)で得られた繰り返し性の高いタンパク質は大腸菌内で発現が見られなかった。そこで、大腸菌、小麦胚芽由来の無細胞翻訳系を用いた発現を試みたが、考えられるあらゆる条件を検討したにもかかわらず十分な発現が確認できなかった。唯一、融合タンパク質としてのみ発現を確認することができた。今後の課題としては、アコヤ貝のモチーフをもった人工タンパク質は、そのマイクロ遺伝子のデザインから再度やりなおす。また、最近、同じように非常に短い単位の繰り返し構造をもつ蜘蛛の絹糸タンパク質が、大腸菌・酵母で発現しないものの、動物細胞で発現した例が報告されているので、動物細胞でも発現も試みてみたい。

The study of the quality of the product is based on the knowledge of the structure and function of the product. The knowledge of the product is based on the quality of the product. The product is based on the quality of the product. The product is based on the quality of the product. To establish a method for recombination of DNA fragments, a method for the utilization of CyberGene, an example of artificial recombination, a method for the accumulation of DNA fragments, a method for the preparation of DNA fragments, b method for the acceleration of DNA fragments, c) Cell-free transformation system is used in artificial transformation and quality generation. a) The function of reconstruction is to confirm the completion of the reconstruction process and the purification of the recombination product. b) The time required to complete the search was significantly shortened when the search was completed. This is the way to apply for a license. c) The cell-free transformation system from which the wheat germ originated was tested and confirmed. Only one, fusion, quality, and discovery can be confirmed. In the future, the problem is that the quality of the product is not stable, and the quality of the product is low. The most recent, the most recent, the most

项目成果

Burke B 他: "Divergent adaptation of tRNA recognition by Methanococcus jannaschii prolyl-tRNA synthetase"J Biol Chem. 276(23). 20286-20291 (2001)

Burke B 等人：“詹氏甲烷球菌脯氨酰-tRNA 合成酶对 tRNA 识别的不同适应”J Biol Chem 276(23) (2001)。

芝 清隆: "蛋白質にひそむくり返し構造--くり返し原理による人工蛋白質の試み"蛋白質核酸酵素. 46(1). 16-25 (2001)

Kiyotaka Shiba：“隐藏在蛋白质中的重复结构 - 使用重复原理创建人工蛋白质的尝试”Protein Nucleic Acid Enzymes 46(1) (2001)。

Cen S 他: "Incorporation of lysyl-tRNA synthetase into human immunodeficiency virus type 1"J Virol. 75(11). 5043-5048 (2001)

Cen S 等人：“将赖氨酰-tRNA 合成酶掺入人类免疫缺陷病毒 1 型”J Virol 75(11) (2001)。

Miyaki M 他: "Alterations of repeated sequences in 5' upstream and coding regions in colorectal tumors from patients with nereditary nonpolyposis colorectal cancer and Turcot syndrome"Oncogene. 20(37). 5215-5218 (2001)

Miyaki M 等人：“患有神经性非息肉病性结直肠癌和特科特综合征的患者的结直肠肿瘤中 5 上游和编码区的重复序列的改变”Oncogene 20(37) 5215-5218。