ブリ類結節症原因菌の病原性に関与する遺伝子の解析

黄尾结节病致病真菌相关基因分析

• 批准号: 08760177
• 负责人: 廣野 育生
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: 東京水産大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760177/
• 关键词: Pasteurella piscicida; ブリ類結節症; ストレスタンパク質遺伝子; in vivo培養

P.piscicidaを市販培地で培養し、対数増殖期の頃にその一部に25%の濃度になるように血清を添加し一定時間培養後、菌体から全RNAを抽出した。ブリ腹腔内での培養は、市販培地で培養した菌液を0.5mlの遠心チューブに入れ、蓋の部分を0.22μmのフィルターとし、ブリの腹を最小限の範囲でナイフで切り、そこから腹腔内にチューブを入れ縫合後、ブリを水槽に戻した。一定時間後にチューブを取り出し、菌体の全RNAを抽出した。対照区として市販培地で培養した菌体の全RNAを用いた。抽出した全RNAの濃度および純度を測定後、これを鋳型として逆転写酵素を用いて一本鎖のcDNAを合成した。次いで、このcDNAを鋳型として市販のRAPD-PCR用のプライマーを用いてPCRを行った。PCR産物を比較し、血清添加培地あるいは腹腔内培養で特異的に増幅してきているDNA断片をクローン化した。RAPD法により血清添加培地あるいは腹腔内培養したP.piscicidaのRNAを鋳型としたときに特異的に増幅してきたDNA断片のうち約250〜1500bpの15種類の塩基配列を決定した。決定した塩基配列をインターネット上のBLASTプログラムでホモロジーサーチを行ったところ、大腸菌の機能不明の遺伝子およびブランチ鎖アミノ基転移酵素およびインフルエンザ菌の夾膜合成に関与するUDP-N-アセチルグルコサミンピロホスホリラーゼと相同性を示すクローンがあった。しかし、他の11クローンはDNAデータバンクに登録されている遺伝子とは全く相同性を示さず未知の遺伝子であった。さらに、これらのDNA断片をプローブとしてRNAドットブロット解析を行ったところ、宿主内の液性因子によりこれらの遺伝子の発現が誘導されていることがわかった。

P.p iscicida を city petty dealers で cultivate し, moral rights worthy of the に colonization period の そ の a に の concentration 25% に な る よ う に serum を add し certain time after the training, bacteria か ら all RNA を drew し た. ブ リ intra-abdominal で の cultivation は, city culture dealers to で し た microbial を 0.5 ml の telecentric チ ュ ー ブ に into れ, cover part の を 0.22 mu m の フ ィ ル タ ー と し, ブ リ の abdomen を minimum の van 囲 で ナ イ フ で り, そ こ か ら intra-abdominal に チ ュ ー ブ を into れ stitches, ブ リ を sink に 戻 し た. After a certain period of time, にチュ にチュ ブを ブを was taken to ブを out, and the whole RNA of the bacterial nucleus was を extracted to た た. In the で cultivation area of と て て and て of the city in the irradiation zone, the <s:1> た bacteriophic whole RNA was cultured using を た た. Spare し た お total RNA の concentration よ び を purity determination, after こ れ を type where と し て を using inverse planning write enzyme い て a lock の cDNA を synthetic し た. Time い で, こ の cDNA を type where と し て in vendor の RAPD - PCR with の プ ラ イ マ ー を with い PCR line を っ て た. PCR products を し, serum add the petty あ る い は intra-abdominal cultivate で specific に rights of し て き て い る DNA fragment を ク ロ ー ン change し た. RAPD method に よ り serum add the petty あ る い は intra-abdominal cultivate し た P.p iscicida の RNA を type where と し た と き に specific に rights of し て き た DNA fragment の う ち about 250 ~ 1500 bp の 15 kinds の salt base with column を decided し た. Decision し た salt base with column を イ ン タ ー ネ ッ ト の on BLAST プ ロ グ ラ ム で ホ モ ロ ジ ー サ ー チ を line っ た と こ ろ, coliform の function unknown の heritage 伝 son お よ び ブ ラ ン チ lock ア ミ ノ base planning shift enzyme お よ び イ ン フ ル エ ン ザ bacteria の sandwiched membrane synthesis に masato and す る UDP - N - ア セ チ ル グ ル コ サ ミ ン ピ ロ ホ ス ホ リ ラ ー ゼ と The same identity を is shown as す ロ ロ があった があった があった. し か し, he の 11 ク ロ ー ン は DNA デ ー タ バ ン ク に login さ れ て い る posthumous son 伝 と は く phase all gay を shown さ ず unknown の heritage 伝 son で あ っ た. さ ら に, こ れ ら の DNA fragment を プ ロ ー ブ と し て RNA ド ッ ト ブ ロ ッ ト parsing line を っ た と こ ろ, host の liquidity factor に よ り こ れ ら の posthumous son 伝 の 発 now が induced さ れ て い る こ と が わ か っ た.

项目成果

Ikuo Hirono: "Cloning and distribution of thehemolysin gene of Vibrio anguillarum" Microbial Pathogenesis. 21. 173-182 (1996)

广野郁夫：“鳗弧菌溶血素基因的克隆和分布”微生物发病机制。