魚類病原細菌の病原性関連遺伝子を用いたDNAワクチンの研究

利用鱼类病原菌致病性相关基因进行DNA疫苗的研究

• 批准号: 11760134
• 负责人: 廣野 育生
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: 東京水産大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11760134/
• 关键词: 免疫関連遺伝子; リアルタイムPCR; 免疫グロブリン; in situハイブリダイゼーション; CD3; Pasteuralla piscicida; Edwardsiella tarda; Lactococcus garivieae; DNAワクチン; 遺伝子銃; 魚病細菌

今年の本研究はDNAワクチン接種後における魚類の生体防御機構のネットワークシステム解明の一貫として、ヒラメにおける免疫および生体防御遺伝子の発現についてリアルタイムPCRを行い定量的に解析した。ヒラメのIL-1,IL-1レセプター,CCケモカイン,CXCケモカイン,CXCケモカインレセプター,IL-8レセプター,TNFレセプター1,TNFレセプター2,TNFスーパーファミリー,Fasリガンド,IgD,IgM,MHCクラス1α,MHCクラス1,MHCクラス2α,MHCクラス2β,TCRα,TCRβC1,TCRβC2,TCRδ,ICSBP,IRF1,IRF4,MIP,TIRについて発現量を定量的に解析した。これらの遺伝子は特定の刺激後、遺伝子の発現量に差がみられ、リアルタイムPCRにより定量することができた。また、従来のRT-PCRの結果と比較したところ、発現量の定量化にはリアルタイムPCRが不可欠であることがわかった。魚類の免疫担当細胞の血液内での比率を明らかにすることはワクチン接種後あるいは病原微生物感染による免疫担当細胞の比率の変化を解明する上で重要である。そこで、抗体産生細胞であるB細胞と細胞性免疫を担当するT細胞をそれぞれ検出できる免疫グロブリンIgMおよびCD3遺伝子を発現する細胞をin situハイブリダイゼーションにより調べた。免疫グロブリンIgMおよびCD3遺伝子発現細胞はヒラメの末梢血白血球中にそれぞれ8%および34%存在した。

This year's study aims to quantitatively analyze the development of fish biological defense mechanisms after DNA vaccination, including the development of immune and biological defense mechanisms. The quantitative analysis of IL-1,IL-1,CC, CXC, CXC,IL-8, TNF, TNF, 2,TNF,Fas,IgD,IgM, MHC 1α,MHC 1α,MHC 2α,MHC 2β,TCRα,TCRβC1,TCRβ C2,TCRδ,ICSBP,IRF1,IRF4,MIP,TIR. The difference between the amount of DNA detected and the amount of DNA detected after specific stimulation was determined by PCR. In addition, the results of recent RT-PCR are compared with each other. However, the quantification of the detected amount is inseparable from real-time PCR. The ratio of immune responsible cells in the blood of fish is important after inoculation with pathogenic microorganisms The antibody-producing cells are called B cells and T cells that are responsible for cellular immunity. The immune response to IgM and CD3 was 8%-34% in peripheral blood leukocytes.

项目成果

Hirono,I.,B.-H.Nam,T.Kurobe,and T.Aoki: "Molecular cloning, characterization, and expression of TNF cDNA and gene from Japanese flounder Paralychthys olivaceus."J.Immunology. 165. 4423-4427 (2000)

Hirono,I.、B.-H.Nam、T.Kurobe 和 T.Aoki：“来自日本牙鲆 Paralychthys olivaceus 的 TNF cDNA 和基因的分子克隆、表征和表达。”J.Immunology。

Pearson,M.D.,I.Hirono,T.Aoki,R.Miranda,and V.Inglis: "Virulence properties of motile aeromonads isolated from farmed frogs Rana tigerina and R.rugulosa."Diseases Aquatic Organisms. 40. 185-193 (2000)

Pearson, M.D.、I.Hirono、T.Aoki、R.Miranda 和 V.Inglis：“从养殖青蛙 Rana Tigerina 和 R.rugulosa 中分离出的运动气单胞菌的毒力特性。”疾病水生生物。

Hirono,I.,H.Yamashita,C-L.Park,T.Yoshida,and T.Aoki: "Identification of genes in KG- phenotype of Lactococcus garvieae, a fish pathogenic bacterium, whose proteins react with anti-KG- rabbit serum."Microbial Pathogenesis. 27. 407-417 (1999)

Hirono,I.、H.Yamashita、C-L.Park、T.Yoshida 和 T.Aoki：“加氏乳球菌（一种鱼类致病菌）KG-表型中基因的鉴定，其蛋白质与抗 KG- 兔血清发生反应。