培養近位尿細管細胞の内向き整流性K^+チャネルの燐酸化・脱燐酸化による活性調節

培养的近端肾小管细胞中内向整流 K^+ 通道的磷酸化和去磷酸化对活性的调节

• 批准号: 08770040
• 负责人: 森 禎章
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: Osaka Medical College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08770040/
• 关键词: ATP依存性K^+チャネル; 腎近位尿細管; パッチクランプ法; オポッサム腎培養細胞; 可逆的蛋白燐酸化; Aキナーゼ; Cキナーゼ

オポッサム腎由来の培養近位尿細管細胞(OK)細胞膜には約90pSの内向き整流性K^+チャネルが存在する。Patch-clamp法のcell-attached patchでは、非刺激状態でこのチャネルの活発な開口が観察されるが、浴液にAキナーゼの特異的阻害剤であるKT5720(200nM)を添加するとチャネル活性が低下する。Inside-out patchでは、浴液にMg^<2+>が存在するとチャネル活性は徐々に低下し(rundown)、Mg^<2+>-ATPを添加することでチャネル活性が回復する。Mg^<2+>-ATP存在下のinside-out patchにおいてKT5720(200nM)の添加によりチャネル活性が低下すること、およびAキナーゼ(20nM)の添加によりチャネル活性が上昇することから、inside-out patchにおけるATPのチャネル活性化作用は細胞膜内側の膜結合性Aキナーゼによる蛋白燐酸化によるものと考えられた。また、浴液10^<-6>MCa^<2+>存在下のcell-attached patchにおいて、イオノマイシンを添加し細胞内のCa^<2+>濃度を上昇させると、このチャネルの活性は著明に低下する。さらに浴液Mg^<2+>-ATP存在下のinside-out patchにおいて、Ca^<2+>濃度を10^<-6>Mまで上昇させてもチャネル活性は殆ど変化しないが、PMA(10μM)とCキナーゼ(1U/ml)の同時添加によりチャネル活性の低下が観察された。このことから、cell-attached patchにおける細胞内Ca^<2+>濃度上昇に伴うチャネル活性の低下は、Cキナーゼ活性上昇に伴う蛋白燐酸化によるものと考えられた。以上より、OK細胞膜において観察されたATP依存性K^+チャネルは、Aキナーゼによる燐酸化部位とCキナーゼによる燐酸化部位を有し、これらの相互作用によりその活性が調節されている可能性が示唆された。

The cell membrane of cultured proximal urinary tubule cells (OK) derived from the kidney was about 90pS and the inward rectifier K^+ cell was present. The cell-attached patch of Patch-clamp method is used to detect the activity of the cell in the non-stimulated state. KT5720(200nM) is added to the cell-attached patch to reduce the activity of the cell. Inside-out patch, Mg^<2+>, Mg ^<2+>, Mg^<2+>In the presence of Mg^<2+>-ATP, the addition of an inside-out patch to KT5720(200nM) decreases the activity of ATP and increases the activity of ATP. The addition of an inside-out patch to KT5720(200 nM) increases the activity of ATP and increases the activity of membrane-bound protein phosphorylation on the inner side of the cell membrane. In the presence of 10^<-6>M Ca ^&lt;2+&gt;, the cell-attached patch was added to increase the intracellular Ca^&lt;2+&gt; concentration, and the cell-attached patch activity was significantly decreased. In the presence of Mg^&lt;2+&gt;-ATP, the inside-out patch and Ca^&lt;2+&gt; concentration of the bath increased at 10 μ <-6>M, resulting in a decrease in cell activity. PMA(10μM) and C (1U/ml) were added simultaneously, resulting in a decrease in cell activity. The increase of intracellular Ca^&lt;2+&gt; concentration is accompanied by the decrease of intracellular Ca^&lt;2+&gt; activity, and the increase of intracellular Ca ^&lt;2 +&gt; activity is accompanied by the increase of protein phosphorylation. The above, OK cell membrane, ATP dependent K^+, K ^+, K

项目成果

窪田隆裕: "腎近位尿細管の水・イオン輸送に対するカテコラミンおよびアンギオテンシン-IIの役割" 大阪医大誌. 55・3. 1-12 (1996)

Takahiro Kubota：“儿茶酚胺和血管紧张素-II 对肾近曲小管中水和离子转运的作用”大阪医科大学学报 55・3.1-12（1996）。