臓器横断的な多層オミクスによるタイト結合分子JAM-Aを介した癌悪性化機構の解明

利用跨器官多层组学阐明紧密连接分子 JAM-A 介导的癌症恶性肿瘤机制

• 批准号: 22KJ2538
• 负责人: 真柄 和史
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2538/
• 关键词: タイト結合; JAM-A; プロテオーム解析

様々ながん腫で異常高発現するJAM-Aと関連したがん悪性化の機序を、(1)分子レベルで、(2)臓器横断的な機序の有無を明らかにすることを目的として、本年度までに以下の実験を実施している。対象としたがん腫は、肺腺がん、子宮頸部腺がん、乳がん、膵がんである。我々のこれまでの研究成果により、肺腺がんや子宮頸部腺がんでは、外科病理検体を用いた免疫組織化学で、JAM-Aが、がんにおいて異常高発現することを確認している。加えて本年度は、乳がんと膵がんについてもJAM-Aの免疫組織化学を行い、がんにおいてJAM-Aが異常高発現することを確認した。次に、複数がん腫で確認されるJAM-Aの異常高発現が、がん細胞の悪性形質にどのような影響を及ぼすのかを解析するために、がん細胞株を用いた検討を行った。肺腺がん細胞株 (LHK2)、子宮頸部腺がん細胞株 (HCA1)、乳がん細胞株 (MCF7)において、CRISPR -Cas9システムによるJAM-Aの発現欠失やsiRNAによる発現抑制により、増殖能、遊走能、浸潤能、抗がん剤への耐性などのがん悪性化能が有意に低下した。膵がん細胞株 (HPAC)については、JAM-A発現欠損株を樹立し、現在、機能解析を行っている。MCF7では、更に、FLAG標識したJAM-Aベクターを野生型株やJAM-A発現欠損株に導入した、JAM-A過剰発現株及びJAM-A発現回復株を樹立した。JAM-Aの過剰発現により増殖能は有意に上昇し、また、JAM-A発現欠損株へのJAM-Aの発現回復で、増殖能が可逆的に回復した。JAM-Aの発現変化に伴う、タンパク発現プロファイルの変化を網羅的に明らかにするため、LHK2とHCA1は野生型株とJAM-A発現欠損株について、MCF7は野生型株、JAM-A発現欠損株、発現回復株について、プロテオーム解析のデータを取得し、現在解析を試みている。

以下实验一直在今年进行，目的是阐明与JAM-A相关的癌症恶性肿瘤的机制，JAM-A在各种癌中，分子水平异常高，以及（2）是否有跨器能机制。靶向癌为肺腺癌，宫颈癌，乳腺癌和胰腺癌。我们先前的研究发现证实，在肺和宫颈腺癌中，JAM-A通过使用手术病理标本通过免疫组织化学在癌症中高度表达JAM-A。此外，今年，我们对乳腺癌和胰腺癌进行了JAM-A的免疫组织化学，并确认JAM-A在癌症中异常高。接下来，我们使用癌细胞系进行了研究，以分析在多个癌中证实的JAM-A异常表达如何影响癌细胞的恶性特征。在肺腺癌细胞系（LHK2）中，宫颈腺癌细胞系（HCA1）和乳腺癌细胞系（MCF7），通过CRISPR-CAS9系统删除JAM-A的表达以及Sirna抑制Sirna的表达，Sirna抑制了诸如癌症恶性的抗药性，不断增多的抗药性，不断降低了癌症的能力。对于胰腺癌细胞系（HPAC），目前正在进行发现一种具有JAM-A表达缺陷的菌株进行功能分析。在MCF7中，还建立了JAM-A过表达和JAM-A表达恢复菌株，其中将标记标记的JAM-A载体引入野生型菌株和JAM-A-A表达不足菌株中。 JAM-A的过表达显着提高了增殖潜力，并且在缺乏JAM-A-A-A可逆回收增殖潜力的菌株中可逆恢复JAM-A表达。为了全面阐明与JAM-A表达变化相关的蛋白质表达曲线的变化，LHK2和HCA1已获得了野生型和JAM-A-A表达不足菌株的蛋白质组分析数据，而MCF7获得了蛋白质组分析数据的蛋白质组分析数据，用于野生型和JAM-A-A-A-A-A表达缺陷菌株，并且正在尝试进行分析。