運動後の損傷筋線維由来因子がヒト骨格筋サテライト細胞活性化に及ぼす機序の解明

本研究課題の遂行に関連して、渡航先のノルウェーにて、ヒト骨格筋を用いた研究を行うために必要な検体の取り扱いの知識や処理方法、分析・解析方法について学んだ。具体的には、筋生検でとれたサンプルの処理方法、凍結切片の作成、免疫組織化学染色・画像解析、電子顕微鏡画像解析である。また、これらの技術や分析トレーニングの一環として、運動による機械的ストレスや損傷によって細胞骨格構造へ蓄積する小型の熱ショックタンパク質αB-クリスタリンを用いて、一過性のレジスタンス運動によって誘発される細胞ストレスの程度を検討した。運動前後に外側広筋から採取した筋生検より凍結切片を作成し、αB-クリスタリンを免疫組織化学染色にて評価した。評価の際には、それぞれの抗体の染まり方についてよい染まり方やよい筋組織像（凍結ダメージを受けていないか、筋線維の横断面をしっかりとれているか等）、アーチファクトの見分け方について学んだ。また筋線維一本ずつに関心領域を設定し、その範囲の輝度を数値化する方法で解析を行った。主観的な指標であるためその影響を受けないように、色のない画像を用いて関心領域を設定するなどして、選択バイアスがかからないように工夫して解析を行った。当初予定していた損傷筋線維由来因子の測定については、実験の実現可能性や詳細について共同研究者と議論中であるが、これらの関連した課題に取り組むことにより本研究課題遂行につながる知識や技術を養うことができた。

本研究課題の遂行に関連して、渡航先のノルウェーにて、ヒト骨格筋を用いた研究を行うために必要な検体の取り扱いの知識や処理方法、分析・解析方法について学んだ。具体的には、筋生検でとれたサンプルの処理方法、凍結切片の作成、免疫組織化学染色・画像解析、電子顕微鏡画像解析である。また、これらの技術や分析トレーニングの一環として、運動による機械的ストレスや損傷によって細胞骨格構造へ蓄積する小型の熱ショックタンパク質αB-クリスタリンを用いて、一過性のレジスタンス運動によって誘発される細胞ストレスの程度を検討した。運動前後に外側広筋から採取した筋生検より凍結切片を作成し、αB-クリスタリンを免疫組織化学染色にて評価した。評価の際には、それぞれの抗体の染まり方についてよい染まり方やよい筋組織像（凍結ダメージを受けていないか、筋線維の横断面をしっかりとれているか等）、アーチファクトの見分け方について学んだ。また筋線維一本ずつに関心領域を設定し、その範囲の輝度を数値化する方法で解析を行った。主観的な指標であるためその影響を受けないように、色のない画像を用いて関心領域を設定するなどして、選択バイアスがかからないように工夫して解析を行った。当初予定していた損傷筋線維由来因子の測定については、実験の実現可能性や詳細について共同研究者と議論中であるが、これらの関連した課題に取り組むことにより本研究課題遂行につながる知識や技術を養うことができた。