膵癌進展におけるヒストン修飾蛋白SETDB1の機能的役割の解明

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本研究はヒストン修飾因子であるSETDB1が膵癌の維持・進行において果たす機能的役割を明らかにするため、Dual-recombinaseシステムによる膵癌モデルマウスを用いて膵発癌後の任意の時期にSETDB1をin vivoでノックアウトし、膵癌の維持・進行におけるSetdb1の機能的役割の解析を試みている。さらに、ヒト膵癌3次元培養システムを用いて患者の膵癌組織からオルガノイドを樹立し、これを用いてSETDB1がヒト膵癌の治療標的となりえるか検証している。上記目的を達成するために本年度は下記のように実施した。まず、作成したFlp/frtシステムで膵癌を形成し、タモキシフェン投与によりCre/loxpシステムでSetdb1をノックアウトできるPdx1-Flp; FSF-KrasG12D; Trp53 frt/+; FSF-Rosa26CreERT2; Setdb1flox/floxマウスの解析を試みた。タモキシフェンを投与して非投与群との比較を検討したが、十分な個体数に十分な量のタモキシフェンを投与してから、ある程度の期間比較し、解析することが困難であった。そのため、十分な個体数を確保して比較するためにこのマウスからオルガノイド、細胞株を樹立し、同所移植モデルを作成してからタモキシフェンを投与してSetdb1をノックアウトし、表現系を検討する方針とした。また、外科手術または超音波内視鏡下穿刺吸引法などで採取したヒト膵がん患者の膵がん組織から3次元培養システムを用いて複数の膵がんオルガノイドの樹立を行った。さらに、Crisper/Cas9システムによるSETDB1ノックアウト用のターゲットベクターを作成した。今後、樹立した複数のヒトオルガノイドを用いてこのベクターやSetdb1阻害剤を用いてSetdb1を阻害した際の表現型を評価する。