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難治性急性骨髄性白血病におけるEVI1遺伝子過剰発現メカニズムの解明

阐明EVI1基因过表达在难治性急性髓系白血病中的机制

基本信息

批准号：
22KJ0806
负责人：
林田裕樹
金额：
$ 1.09万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ0806/
关键词：
EVI1 白血病

项目摘要

EVI1は正常造血に必須で未分化な造血細胞分画に特異的に発現することが知られている。EVI1遺伝子が過剰発現した急性骨髄性白血病は極めて予後不良であり、特異的な治療法の開発が望まれている。本研究は、EVI1遺伝子の発現制御機構の解明を目指している。まず、EVI1高発現のヒト白血病細胞株において、EVI1遺伝子の終止コドンの位置にP2A-EGFP配列をノックインし、EVI1の発現量がGFPの蛍光強度と相関する細胞株を作成した。この細胞株に全ゲノムCRISPR/Cas9ノックアウトライブラリを導入し、フローサイトメーターを用いてGFPの蛍光が弱い細胞集団(GFPLow)と強い細胞集団(GHPHigh)に分別し、次世代シーケンサーで解析した。もしEVI1発現を増加させる因子がノックアウトされればGFPの蛍光が低下すると予想されるので、GFPLowで多く検出されたsgRNAの標的遺伝子を、統計学的にランキングして抽出した。上位の遺伝子について個別にノックアウト実験を行ったところ、複数のEVI1高発現細胞株において共通してEVI1の発現を増加させる因子を複数同定した。このうち、最も強くEVI1の発現に影響を与えた因子は、急性骨髄性白血病において細胞増殖やアポトーシス抑制作用を有する転写因子として報告されていたが、EVI1との関係については論じられたことがない因子であった。ChIP-seqでは、同因子はEVI1のプロモーター領域に結合することが示唆されている。今後、この因子がEVI1の発現にどのように関わっているのか、さらに詳細な検討を行っていく予定である。

Normal hematopoiesis in EVI1 patients requires the differentiation of undifferentiated hematopoietic cells to differentiate specific hematopoietic cells. Patients with acute osteoblastic leukemia are suffering from severe acute myeloid leukemia (EVI1), and there is a special treatment for acute bone leukemia. The purpose of this study is to clarify that the purpose of this study is to make it clear that the purpose of the EVI1 system is to make it clear that the target is to be used. The cell lines of leukemia were detected by EVI1, the position of P2A-EGFP was measured by P2A-EGFP, and the cell line was made by measuring the light intensity of GFP. The whole CRISPR/Cas9 cell line, the whole cell, the whole cell, Now that the EVI1 has been added to the list of factors, such as the number of factors, the GFP, the low light, the expectation, the GFPLow, the sgRNA, the statistics, the extraction, etc. In the case of the parent child, the number of copies of the cell line is not the same as that of the EVI1 cell line. The number of copies of the factor is the same as that of the EVI1. There are some factors in the inhibition of acute osteoblastic leukemia (AL), acute bone leukemia (AL), acute osteoblastic leukemia The combination of ChIP-seq and EVI1 data of the same factor in the field of communication shows that you are instigated to make a mistake. From now on, the factor EVI1 will show that you are not in a position to make a decision.