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Comprehensive analysis of intrinsically disordered proteins important for protein homeostasis

对蛋白质稳态重要的本质无序蛋白质的综合分析

基本信息

批准号：
22KJ0830
负责人：
石塚達也
金额：
$ 1.09万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒトには超天然変性タンパク質が数百種類存在すると予測されているが、機能については不明な点が多い。本申請課題はこれらの細胞内での重要性と機能の解明を目的としている。近年報告された超天然変性タンパク質であるHeroタンパク質のタンパク質安定化という機能に着目し、タンパク質が不安定化するストレスにおいて細胞の生存に重要なタンパク質を網羅的に同定することで、超天然変性タンパク質の細胞における重要性を明らかにすることができるのではないかと考えた。まず、HEK293T細胞とCRISPR-Cas9システムを用いてヒトの約2万個の遺伝子をターゲットとしたスクリーニングを行い、タンパク質安定化に重要な遺伝子を網羅的に同定した。当該年度はこのスクリーニングの結果から高い重要度が示された遺伝子2000個ほどを抽出し、同じ条件で小規模で解像度の高い二次的なスクリーニングを行った。また、このスクリーニングの対象に全長にわたって高い天然変性スコアを持つ「超天然変性タンパク質」も追加することで、タンパク質安定化に重要な遺伝子との比較を試みた。その結果、タンパク質不安定化ストレス下で超天然変性タンパク質の重要度が特に高いという結果は得られなかった。一方で、通常の培養環境での細胞の生存に重要な超天然変性タンパク質がいくつも存在することが明らかになった。これらのタンパク質がどのようにして細胞の生存に寄与しているのかを明らかにするために、次に個別の機能解析を行なった。生存に重要な超天然変性タンパク質をいくつか選択し、ノックダウン後の遺伝子発現の変化をRNA-seqを用いて解析した。その結果、二種類がミトコンドリアゲノム上の遺伝子の発現に影響を与えることが確認された。現在はイメージング等を用いたさらに詳しい解析を行なっている。

There are hundreds of kinds of super-natural substances, and there are many unknown points in the function. The subject of the present application is the importance and purpose of understanding the function of intracellular cells. In recent years, it has been reported that the importance of ultra-natural properties in cell survival has been clarified due to the importance of ultra-natural properties in cell survival. About 20,000 genes are used in the CRISPR-Cas9 system of HEK293T cells. When the results of this year's survey are changed from high importance to high importance, 2000 samples are extracted, and the same conditions are used for small-scale and high-resolution surveys. The total length of the object is high, and the natural quality is high. The comparison of the important elements in the stability of the object is tried. As a result, the quality of the product is unstable, and the importance of the ultra-natural quality of the product is extremely high. In general, it is important for the survival of cells in culture environment. The quality of the cell is determined by the function of the cell. The importance of survival is to change the nature of the gene, to change the expression of the gene, and to use RNA-seq to analyze it. As a result, two types of information are available on the Internet, and the impact of information on the Internet is confirmed. Now, we're going to have to go through this.