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新しいモーター蛋白KIFと特異的に結合する軸索内膜小器官上の蛋白の検索

寻找轴突内膜细胞器上与新运动蛋白 KIF 特异性结合的蛋白质

基本信息

批准号：
08680828
负责人：
竹村玲子
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Okinaka Memorial Institute for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08680828/
关键词：
KIF キネシン微小管軸索輸送

项目摘要

神経細胞の軸索では微小管のレールに沿って種々の膜小器官が運ばれている。細胞体からシナプス方向への輸送には、キネシンスーパーファミリー蛋白(KIF)のKEF1A,KIFF1B,KIF2,KIF3A/B,KIF4,KIF5がモーターとして働いている。KIF1Aはシナプス小胞の前駆体、KIF1Bはミトコンドリアの輸送に関わっていると考えられ、他の各KIFもそれぞれ特異的な膜小器官の輸送に関わっている可能性が高く示唆されている。それぞれのKIFが特異的な膜小器官を輸送する為には、各KIFとtargetの膜小器官の間に互いを特異的に認識する機構が存在することが必要である。その機構を解明することは、輸索輸送の機構を明らかにするのに重要であると思われる。キネキンは、N末のglobularなdomainで微小管と結合し、軽鎖の結合するC末部で膜小器官に結合する。KIFと膜小器官が互いを特異的に認識する機構としては、各膜小器官には各KIFを特異的に認識する膜蛋白の存在する可能性が高い。キネシン(KIF5)の結合蛋白の1つとして、アフィニィティカラムを用い、ER上に存在するキネクチンが同定されたが、その後の研究では必ずしもキネシンと標的膜小器官との相互作用の特異性を担う蛋白ではない可能性が高くなってきている。本研究では、KIF1〜KIF4の膜小器官上の結合蛋白をrabphilinの同定・精製で成功しているchemical crosslinkerによる方法を用いて検索した。KIFの結合蛋白を同定する材料としては、KIFが膜小器官に結合している比率の高いラットの馬尾microsome分画を用い、chemical crosslinkingによりKIFと結合蛋白のcomplexを検出した。現在、結合蛋白を精製する方法を検討中で、培養細胞を用いた系についても検討中である。

The axon of the neuron changes from microtubule to microtubule, and the membranous small organ changes from microtubule to microtubule. The cells are divided into three groups: KIF1A, KIF1B,KIF2,KIF3A/B,KIF4,KIF5. KIF1A and KIF1B are highly likely to be involved in the transport of small membranous organs. The KIF is a unique membrane organ transport mechanism, and the KIF targets a unique membrane organ transport mechanism. The mechanism of cable transportation is important. The membrane of the small organ is connected to the membrane of the small organ. KIF membrane small organs have a high probability of recognizing the existence of membrane proteins specific to each KIF membrane small organ. The binding protein of KIF5 has a high possibility of interaction with membrane small organs. In this study, we successfully identified and purified rabphilin binding proteins on membrane small organs of KIF1 ~ KIF4 by using a chemical crosslinker method. KIF binding protein is identified in the same material as KIF binding protein in small membrane organs, and the high ratio of KIF binding protein to KIF binding protein in cauda equina microsomes is identified in chemical crosslinking. Now, the method of purification of binding protein is under discussion, and the method of culture of cells is under discussion.