アミロイド前駆体蛋白質のカルボキシ末端に結合する新しい細胞性蛋白質の同定と解析

与淀粉样前体蛋白羧基末端结合的新细胞蛋白的鉴定和分析

• 批准号: 09680757
• 负责人: 助川 淳
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09680757/
• 关键词: アミロイド前駆体蛋白質; アルツハイマー病; 細胞質内ドメイン; アルマハイマー病

アミロイド前駆体蛋白質(b-Amyloid Precursor Protein:APP)は、アルツハイマー病の患者脳に見られる老人斑の沈着物、ペータアミロイドペプチド(Aβ)の前駆体である。APPは、その分子の構造から細胞表面の何らかの受容体ではないかと推測されているが、正常細胞における生理的機能については殆ど報告がない。APP分子の細胞内での本来の生理的機能を明らかにすることはアルツハイマー病の分子レベルでの本態を理解しその治療及び予防方法を探るために、再重要課題の一つであると思われる。本研究では、APPのこの細胞質内ドメインに結合する未知の細胞性蛋白質のcDNAクローニングを行った。酵母の遺伝学的手法を利用したTwo-Hybrid法を用い、APPの細胞質内ドメインに結合する蚤自質をスクリーニングし、新しい細胞性蚤白質、p268を同定した。cDNAの塩基配列から予想されたこの蚤白質は、2,382アミノ酸からなり、既知の機能的なドメインは認められなかった。Northern Biot、またWcstcrn Blotによって、この蚤白質が、脳を合めて種々の臓器、組織で普遍的に発現していることが確認された。P268のカルポキシ末端(APPとの結合ドメインを含むと思われる)を培養細胞に導入すると、このポリペプチドが、膜蛋白質としての修飾を完全に受けていない未成熱型APPと結合することが明らかとなった。また、正常細胞においても、APPを免役沈降すると、p268が共沈することが示された。P268のカルボキシ末端を導入した細胞からのAβの産生貴を調べてみると、アミロイド沈着の原因とされるAβ42の産生は有意に減少したが、Aβ42に比較して、より沈着しにくいとされるAβ40の産生量に有意な変化は見られなかった。

B-Amyloid Precursor Protein (APP) is the precursor protein of senile plaque and Aβ protein in patients with senile plaque. The molecular structure of APP is different from that of cell surface, and the receptor is different from that of normal cell. The physiological function of APP molecules in cells is to be understood, and the treatment and prevention methods of APP molecules are to be explored. In this study, the cDNA library of APP, an unknown cellular protein, was developed to bind to this cytoplasmic protein. Yeast genetic techniques are used in the application of the Two-Hybrid method, APP cytoplasmic DNA binding, free DNA binding, new cytoplasmic DNA binding, and p268 binding. cDNA base alignment is expected to be a straight line, 2,382 amino acids, known functions of the line. Northern Biot, Wcstcrn Blot, Straightline, Combination, Organ, Tissue, Universal Discovery, Identification P268 protein binding terminal (APP binding terminal) is introduced into cultured cells, and membrane protein modification is completely affected. The expression of p268 in normal cells, APP, and immune system is also shown. The production of Aβ is regulated by the introduction of P268 into the cells. The production of Aβ42 is intentionally reduced by the introduction of P268 into the cells.