細胞表面に局在する受容体分子数の人為的調節に向けた基礎的技術開発

人工调节细胞表面受体分子数量的基础技术开发

• 批准号: 16659064
• 负责人: 助川 淳
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659064/
• 关键词: 細胞表面受容体; 内在化; エンドサイトーシス

細胞表面受容体の過剰な活性発現は、細胞の癌化や高血圧症など種々の病態の原因になっており、従来薬物治療の標的として注目されてきた。本研究は、疾病にかかわる特定の受容体の局在性や総量を、受容体ソーティングの機能を利用し人為的に調節することを目的とした。すなわち、受容体内在化のトリガーになる可能性を持つタンパク質を細胞の内部から当該受容体にターゲティングさせ、受容体分子を強制的に内在化させる事を試みた。モデル受容体としては、チロシンキナーゼ活性を持つErbB2受容体と、Gタンパク質共役型受容体である1型アンジオテンシンII受容体を使用した。1.予備実験として、ErbB2受容体の内在化を促進すると考えられるcblと受容体分子との融合タンパク質を培養細胞系で発現させた。融合タンパク質の細胞内局在を蛍光抗体法により観察したところ、細胞表面発現が減少し、細胞内にエンドソームに一致する当該タンパク質の凝集像が認められ、受容体分子の細胞内ソーティングに影響を与えていることが確認された。2.ErbB2受容体、および1型アンジオテンシンII受容体の細胞質内ドメインを大腸菌で発現させ、マウス腹腔に投与免疫した。免疫血清を用いたウエスターン法により、良好な特異的抗体の産生を確認した。3.免疫マウスの脾臓からRNAを精製し、抗体遺伝子cDNAをRT-PCR法にて合成増幅し、ファージディスプレイ法を利用し、一本鎖抗体をファージ表面に発現するライブラリーを作成した。4.一本鎖抗体発現ファージライブラリーから、受容体細胞質内ドメインと反応するクローンの分離を試みたが成功に至っていない。そのため、免疫マウスの脾臓を利用し、受容体細胞質内ドメインに特異的な抗体を産生するハイブリドーマを作成し、その特異的抗体遺伝子から一本鎖抗体を作成すべく、実験を継続中である。

The activity of cell surface receptor has been detected, and the causes of several diseases such as cytophagy, cancer, hyperemia, and phytotherapy have been reported. In this study, the specific recipients of diseases and diseases were able to make use of human-made drugs for the purpose of making use of the capacity of the recipients. The possibility of internalization in the receptacle and the possibility of internalization in the receptive body should be the internalization of the molecules of the receptive body. The ErbB2 acceptor, the co-operative receptacle, the II receptacle, the co-operative receptacle, the capacitor, the capacitor, the 1. In order to promote the internalization of ErbB2 receptors, we need to study the fusion of cbl receptor molecules and cell lines. In the light antibody method, the intracellular level was detected by light antibody method, the cell surface was less, the intracellular surface was less, the cellular surface was less, the intracellular surface was 2.ErbB2 recipients, II recipients, II recipients, cytopathic bacteria, intraperitoneal injection and immunity were detected. The immune serum was confirmed by the use of anti-virus antibody and good specific antibody. 3. Immunity, spleen, RNA, antibody, cDNA, RT-PCR, antibody, antibody, spleen, spleen, 4. A book of antibodies shows that the cells of the recipients are infected, and that the recipients are separated from each other successfully. The antibodies in the cells of the recipient, the antibodies in the cells, the antibodies in the cells, the antibodies, the antibodies.