Systematic shRNA and siRNA screens to investigate drug resistance in human leukemia

Deses Z-Projekt hat zwei Ziele：Erstens stellt es der Klinischen Forschergruppe zurzeit in unserer Gruppe Verfügbaar shRNA-und siRNA-abhänGige Screen-Technologien zur Verfügung.Dese Screen Basieren auf zwei komplexen sh(短发夹)-RNA bezieonggSweise siRNA Bibliotheken。这本书是NKI von der Gruppe von Rene Bernards konstruciert Worden and tenält annähernd 24,000 shRNA Vektoren，die gegen 8,000 Human gene gerichtet sind。Zweite“Bibliothek”is eine Kommerzielle siRNA-Sammlong MIT Insgesamt 23,000 einzelnen siRNA寡核糖核酸池；Aus Dieser Bibliothek haben wir bereits subbiiotheken，die gegen alle Human en Kinasen and alle Human en Ubiquitin-Ligasen ententen，erstellt.其中包括siRNA-Bibliothek、DNA-Reparatur和Checkpoint-Protein gerichtet，erstellen。在这样的情况下，我不知道该如何使用技术。Zum Beispiel haben wir mehrrere筛网，自动免疫荧光法，麻省理工学院自动机，Konfokaler Mikroskopie duchgefüHRT。这是一个很重要的问题，因为它是最重要的，也是最重要的。大足是适应技术的人，是人，也是人。Wir den Dann leukämische Zellen MIT Mischungen lentiviraler Vektoren，die jeweils eine shrna gegen ein gen exmimieren，infizieren，and die zellen in et al.，2006)。当在贴壁细胞中进行这种筛查时，这种筛查相当容易，而且仅限于包含多达1-2000个成员的基因家族，因为它们可以被吸管，另一种选择是使用逆转录病毒或慢病毒文库。一个主要的优点是，这种kLonocienen分析和在Gegenwartvon化疗药物的材料；Lang fristig是一种植物，在SCID-Mäuse zu移植和治疗的Protokolle duchzuführen。所有的人都知道，我们的生活并不是这样的，因为我们的生活并不顺利。在Leukämiezellen zu analysieren中，Ziel der ersten Förderperide is es，Einen“Proof-of-Print”zu erhalten，der Zeigt，dass es möglich ist，MIT diesem Anatz·Resistenzphänoene in Leukämiezellen zu analysieren。

Dieses Z-Projekt hat zwei Ziele: Erstens stellt es der Klinischen Forschergruppe zurzeit in unserer Gruppe verfügbare shRNA- und siRNA-abhängige Screening-Technologien zur Verfügung. Diese Screens basieren auf zwei komplexen sh(short hairpin)-RNA beziehungsweise siRNA Bibliotheken. Die erste Bibliothek ist am NKI von der Gruppe von Rene Bernards konstruiert worden und enthält annähernd 24,000 shRNA Vektoren, die gegen 8,000 humane Gene gerichtet sind. Die zweite „Bibliothek" ist eine kommerzielle siRNA-Sammlung mit insgesamt 23,000 einzelnen siRNA Oligonukleotidpools; aus dieser Bibliothek haben wir bereits Subbibliotheken, die gegen alle humanen Kinasen und alle humanen Ubiquitin-Ligasen enthalten, erstellt. Innerhalb der klinischen Forschergruppe werden wir entsprechend eine siRNA-Bibliothek, die gegen alle DNA-Reparatur- und Checkpointproteine gerichtet ist, erstellen. Diese Bibliotheken sind bereits mit mehreren Technologien durchsucht werden. Zum Beispiel haben wir mehrere Screens, die auf Immunfluoreszenz-Methoden basieren, mit Hilfe automatisierter, konfokaler Mikroskopie durchgeführt. Das zweite Ziel dieses Projektes besteht darin, Technologien zu adaptieren, die es erlauben, nach Genen zu suchen, die für das Wachstum von leukämischen Stammzellen und die Entwicklung von Chemoresistenz essentiell sind. Dazu werden wir Techniken adaptieren, die es erlauben, die Frequenz individueller shRNA Vektoren in komplexen Mischungen solcher Vektoren zu bestimmen. Wir werden dann leukämische Zellen mit Mischungen lentiviraler Vektoren, die jeweils eine shRNA gegen ein Gen exprimieren, infizieren, und die Zellen in et al., 2006). Such screens are fairly easy when they are performed in adherent cells and are limited to gene families hat contain up to 1-2000 members, since they can then be pipetted An alternative is to use retroviral or lentiviral libraries. One major advantage is that this klonocienen Assays und in Gegenwart von chemotherapeutischen Substanzen ausplattieren; langfristig ist geplant, infizierte Zellen zu in Scid-Mäuse zu transplantieren und therapienahe Protokolle durchzuführen. Anschließend werden wir bestimmen, für und gegen welche shRNA Vektoren während dieser Prozesse selektiert wird und daraus Rückschlüsse auf • diejenigen Gene ziehen, die für jeden Prozess notwendig sind. Ziel der ersten Förderperiode ist es, einen „proof-of-principle" zu erhalten, der zeigt, dass es möglich ist, mit diesem Ansatz • Resistenzphänomene in Leukämiezellen zu analysieren.