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Development of an in vivo model for the evaluation of childhood leukemia using the hematopoietic environment within a teratoma.

利用畸胎瘤内的造血环境开发用于评估儿童白血病的体内模型。

基本信息

批准号：
22K19681
负责人：
高橋正行
金额：
$ 4.08万
依托单位：
Central Research Institute of Electric Power Industry
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-06-30 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

計画初年度となる2022年度は、小児白血病遺伝子発現ヒトiPS細胞を用いたテラトーマの形成と、テラトーマ内に含まれる血液細胞の前白血病状態への移行を検討した。小児白血病遺伝子発現ヒトiPS細胞には研究代表者がこれまでに樹立したETV6-RUNX1発現ヒトiPS細胞を用い、研究分担者が開発した方法を参考に、重度免疫不全マウスに移植することでテラトーマを形成した。テラトーマ内には、ヒトCD45陽性細胞が含まれており、B細胞系や骨髄球系への分化が進んでいること確認した。移植したヒトiPS細胞はDOX存在下でのみ ETV6-RUNX1を発現する特徴を有するため、テラトーマ形成マウスに DOXを飲水投与し、テラトーマ内のヒト血液細胞において ETV6-RUNX1を発現・作用させた。DOXの飲水投与下で飼育しテラトーマを増大させた後、フローサイトメトリーにて詳細に解析した結果、ETV6-RUNX1発現ヒトiPS細胞を移植したマウスのテラトーマには、正常なヒトiPS細胞由来のテラトーマと比較し、Pro-B細胞後期からPre-B細胞に当たるヒトCD10陽性細胞が顕著に高い割合で含まれていることを確認した。CD19陽性細胞に対するCD10陽性細胞の割合比が高かったことから、CD10陽性細胞からCD19陽性細胞への分化段階で障害が生じたと考えられ、ETV6-RUNX1の発現・作用により前白血病様の状態へと移行したことが示唆された。また、乳児期に発症するALLに特徴的に検出され予後不良の指標でもある、 KMT2A-AFF1に着目し、新たに KMT2A-AFF1発現ヒトiPS細胞を樹立した。ETV6-RUNX1発現ヒトiPS細胞と同様、 KMT2A-AFF1の発現にはDOXによる発現誘導システムを採用した（学術論文の投稿準備中）。

In the initial year of the project, the development of leukemia cells and the development of pre-leukemia cells in iPS cells will be discussed in 2022. The development of iPS cells for small leukemia was studied on behalf of ETV6-RUNX1, and the development of iPS cells was studied on behalf of severe immunodeficiency. CD45-positive cells were identified in the differentiation of B-cell lines and osteoblasts. ETV 6-RUNX1 develops in the presence of DOX DOX's water supply increased significantly, and ETV6-RUNX1 was found to contain iPS cells. CD19-positive cells are associated with CD10-positive cells, CD10-positive cells are associated with CD19-positive cells, CD10-positive cells, All the symptoms in the lactation period were detected, and the results showed that the KMT2A-AFF 1 cells were newly established. ETV6-RUNX1 development and development of iPS cells, KMT2A-AFF 1 development and development induction system (preparation of academic paper)