老化に伴い増加するエオシン陽性封入体の構成タンパク質同定と相分離の観察

随年龄增长而增加的伊红阳性包涵体的组成蛋白的鉴定和相分离的观察

• 批准号: 22K19737
• 负责人: 大滝 博和
• 金额: $ 4.08万
• 依托单位: Tokyo University of Pharmacy and Life Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-06-30 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K19737/
• 关键词: アミロイド; 視床; 封入体; 神経変性疾患; プロテオミクス解析; 非膜オルガネラ

当該研究は，老化に伴い増大するマウス視床の凝集体の本体とその凝集様式を明らかにすることにより，難治性疾患である筋硬直性ジストロフィーのエオシン陽性視床封入体の実体を解明することと疾患進行に至る神経機能変容を理解することを目的として計画した．この目的を達成するために，(1)プロリンcis/trans異性化酵素(pin1)の遺伝子欠損マウス(KO)を用いベータアミロイド抗体陽性非膜オルガネラの実体の解明，(2)非膜オルガネラの形成過程の解明および(3)筋硬直性ジストロフィーのエオシン陽性視床封入体の実体を解明することと疾患進行に至る神経機能変容を患者の視床封入体の実体の解明をマイクロダイセクションとLC-MS/MSの組み合わせたプロテオミクス解析を中心に行う。応募者は，pin1 KOが老化伴い視床の神経細胞の細胞質にベータアミロイド抗体陽性凝集体を増大すると認めている。その凝集体は液－液相分離が形成に深く関わる非膜オルガネラの特徴を有する。更に筋硬直性ジストロフィー患者のエオシン陽性視床封入体がマウスの凝集体と病理組織学的特徴が一致することを見出している。このように当該研究は応募者の予備的研究結果をもとに見出され，pin1 KOによる凝集体の本体と形成過程を明らかにすることによりDMの視床封入体や神経機能の変容による病態の進展を明らかにしようとする萌芽な挑戦的研究である。当該年度はマウス視床のベータアミロイド陽性凝集体の本体を探索すべき150日齢から600日齢のマウスの視床を採取しウエスタンブロットによる解析を行った．特に．不溶性画分は内因性コントロールである可溶性タンパク質が検出されないことからこれらの解決のために，Stain-freeの方を用いた電気泳動バンドの総タンパク質量を持ちノーマライズする新しい定量法の確立を試みた．

When the study は, aging に companion い raised large す る マ ウ ス depending on bed の coagulation collective の ontology と そ の agglutination others type を Ming ら か に す る こ と に よ り, intractable disease で あ る reinforced hard laymen ジ ス ト ロ フ ィ ー の エ オ シ ン positive regard the sealed bed body の be body を interpret す る こ と と disorders に to る 経 function - god let を understand す る こ と を purpose と し て project し た. こ の purpose を reach す る た め に, (1) プ ロ リ ン cis/trans heterosexual phenoloxidase (pin1) の heritage 伝 son owe loss マ ウ ス (KO) を い ベ ー タ ア ミ ロ イ ド antibody positive of membrane オ ル ガ ネ ラ の be の interpret body, (2) the membrane オ ル ガ ネ ラ の formation の interpret お よ び (3) hard laymen ジ ス ト ロ フ ィ ー の エ オ シ ン positive regard the sealed bed body の be body を interpret す る こ と と disorders に to る 経 function - god let の を patients depending on the sealed bed body の be body の interpret を マ イ ク ロ ダ イ セ ク シ ョ ン と LC - MS/MS の group み close わ せ た プ ロ テ オ ミ ク Youdaoplaceholder0 parses the を center に line う. 応 raise は, pin1 KO が aging with い depending on bed の god の 経 cell cytoplasm に ベ ー タ ア ミ ロ イ ド antibody positive coagulation collective を raised large す る と recognize め て い る. The そ <s:1> condensate そ liquid-liquid phase separation が forms に deep く relations わる non-membrane <s:1> ガネラ ガネラ ガネラ <s:1> characteristics を include する. More に reinforced hard laymen ジ ス ト ロ フ ィ ー patients の エ オ シ ン positive regard the sealed bed body が マ ウ ス の coagulation collective と pathological histology of 徴 が consistent す る こ と を see out し て い る. こ の よ う に when the study は 応 raise is の reserve results を も と に shows さ れ, pin1 KO に よ る clot formation process of collective の ontology と を Ming ら か に す る こ と に よ り DM の depending on the bed body や god 経 sealed function の - let に よ る pathological の progress を Ming ら か に し よ う と す る bud な pick 戦 research で あ る. When the annual は マ ウ ス depending on bed の ベ ー タ ア ミ ロ イ ド positive coagulation collective の ontology を explore す べ き 150 齢 か ら 600 齢 の マ ウ ス の depending on bed を take し ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト に よ る parsing line を っ た. Special に. Insoluble draw points は endogenous コ ン ト ロ ー ル で あ る soluble タ ン パ ク qualitative が 検 out さ れ な い こ と か ら こ れ ら の solve の た め に, Stain - free の party を with い た electric 気 swimming バ ン ド の 総 タ ン パ ク quality を hold ち ノ ー マ ラ イ ズ す る new し い の quantitative method to establish を try み た.

项目成果

Mild-intensity running exercise recovered motor function by improvement of ankle mobility after unilateral brain injury of mice using three-dimensional kinematic analysis techniques

• DOI: 10.1016/j.brainres.2022.148160
• 发表时间: 2022-11-17
• 期刊: BRAIN RESEARCH
• 影响因子: 2.9
• 作者: Yoshikawa，Akira;Ohtaki，Hirokazu;Izumizaki，Masahiko
• 通讯作者: Izumizaki，Masahiko

Pin1KOマウスにおける視床に増加するβアミロイド陽性反応はエオシン陽性封入体に類似する。

Pin1KO 小鼠丘脑中 β-淀粉样蛋白阳性率的增加类似于伊红阳性内含物。

• 发表时间: 2023
• 作者: 清水純也;河野史倫;田中志弥，吉川輝，内田隆史，小野賢二郎，柿田明美，本田一穂，大滝博和.
• 通讯作者: 田中志弥，吉川輝，内田隆史，小野賢二郎，柿田明美，本田一穂，大滝博和.

Amyloid-positive particles in pin1 KO mice are resemble with eosinophilic thalamic body in human.

pin1 KO小鼠中的淀粉样蛋白阳性颗粒与人类的嗜酸性丘脑体相似。

• 发表时间: 2022
• 作者: OHTAKI H;ONO K;TANAKA M;SETOGUCHI Y;HAYASHI A;YOSHIKAWA A;KANG D;HONDA K;KAKITA A;UCHIDA T.
• 通讯作者: UCHIDA T.

マウス熱中症モデルを用いた熱中症後の小脳白質・ Purkinje細胞・シナプス傷害の検討

使用小鼠中暑模型检查中暑后小脑白质、浦肯野细胞和突触损伤

• 发表时间: 2022
• 作者: 宮本和幸;大滝博和;中村元保;島田拓哉;柳沢薫;山荷大貴;鈴木恵輔;本田一穂;土肥謙二
• 通讯作者: 土肥謙二

Cis/trans-isomerase（Pin1）の欠損は神経変性疾患モデルとなりえるのか。～失敗から学ぶ研究の方法～

顺式/反式异构酶 (Pin1) 缺陷可以作为神经退行性疾病的模型吗？

• 发表时间: 2022
• 作者: 清水純也;河野史倫;梅田涼平,岡成和夫,寺西仁志,鹿野健史朗,花田礼子;押本大誠，渡辺日香里，Loew Noya，元祐昌廣，美川務，四反田功，板垣昌幸;早田匡芳;大滝博和
• 通讯作者: 大滝博和