Regulation of oncogenic RAS-induced endoplasmic reticulum stress response by zinc signaling

通过锌信号调节致癌 RAS 诱导的内质网应激反应

• 批准号: 22K11710
• 负责人: 枝松 裕紀
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K11710/
• 关键词: RAS遺伝子; がん; 小胞体ストレス; IRE1; PERK; ATF4; 亜鉛; 統合的ストレス応答; UPR; 細胞内シグナル伝達; MAPキナーゼ

本年度は、まず、RASシグナルによる小胞体ストレスセンサー分子IRE1の活性化と、それに対する細胞内亜鉛の影響を検討した。活性型変異体Hras（HrasG12V）を誘導発現するラット胎児線維芽細胞株Rat-1細胞由来の細胞（Rat-1RasVal細胞）において、IRE1活性化依存的なXbp1の非定型スプライシングがHrasG12V発現により誘導されることを確認した。また、HrasG12V発現によりIRE1のタンパク質の量が増加することも見出した。これらHrasG12V発現が引き起こすIRE1の変化は、MEK/ERK経路を介していることを阻害剤実験で明らかにした。そこで、IRE1の活性と相関し得るリン酸化の検出をphostag法で試みたところ、HrasG12V発現でIRE1のリン酸化が著しく亢進することがわかった。しかし、当初期待した亜鉛依存的なリン酸化については、phostag法の条件を様々に変えてはみたが現時点では検出されていない。またIRE1タンパク質の量の増加についても、プロテアソーム阻害剤などを用いて検討したが、HrasG12V発現や亜鉛濃度による影響は観察されなかった。そこで方針を変え、HrasG12V誘導発現や亜鉛欠乏による細胞死応答が生じないマウス胎児線維芽細胞株3T3細胞由来の細胞（3T3RasVal細胞）で、同様の解析を試みた。その結果、3T3RasVal細胞では、HrasG12V発現ではIRE1活性化依存的なXbp1の非定型スプライシングが誘導されないことがわかった。以上から、HrasG12VによるMEK/ERK依存的IRE1活性化には、Rat-1にはあるが3T3にはない機構が関与すると考えられた。また、Rat-1RasVal細胞を用いた解析の過程で、培地への亜鉛添加とHrasG12V発現とに依存して変化する新たなシグナル系を見出した。

This year, the activation of RAS molecule IRE1 in small cells and the influence of intracellular lead on IRE1 were carried out this year. Active allogeneic Hras (HrasG12V) induces the development of embryonic embryonic stem cell line Rat-1 cells (Rat-1RasVa l cells) and IRE1 activation-dependent NXbp1 non-stereotype HrasG12V HrasG12V-induced HrasG12V has been confirmed.また、HrasG12V発appearによりIRE1のタンパクqualityのincreased and することも见出した.これらHrasG12V発appearがinducedきriseこすIRE1の変化は、MEK/ERK経路を Introductionしていることを hinder 剤実験で明らかにした.そこで、IRE1 activity and correlation し得るリン acidification の検出をphostag method でtest みたところ、HrasG12V発appears and IRE1のリンacidificationが出しく Hyperactivityすることがわかった.しかし、I was looking forward to the した亜なリン acidified については、phost The condition of ag method is that the current point is the same as the current point.またIRE1タンパクqualityのincreaseのincreaseについても、プロテアソーム hinder剤などを用いThe effect of lead concentration on HrasG12V has been determined.そこでを変え、HrasG12V-induced development や亜亜亜朜朜濜による Cell Deathが生じないマウスThe cells from which the fetal uterine fibroblast cell line 3T3 cells were derived (3T3RasVal cells) were analyzed and analyzed. As a result, 3T3RasVal cells were exposed and HrasG12V was found to be dependent on IRE1 activation. Xbp1 was induced by amorphous Xbp1. Above, HrasG12V and HrasG12V are related to MEK/ERK-dependent activation of IRE1, Rat-1 and Rat-1 3T3 structures, and HrasG12V and ERK.また、Rat-1RasVal cells are analyzed with いた and the process is で, and the ground への亜 lead is added and HrasG12V is now とにdepends on して剉化する新たなシグナルSystem を见出した.