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組換えホットスポット活性化因子Ｐｒｄｍ９の機能解析と抑制因子の探索

重组热点激活子Prdm9的功能分析及抑制子的寻找

基本信息

批准号：
13J08945
负责人：
河野宏光
金额：
$ 2.05万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年は研究の最終年度として、「Prdm9 Knock In (KI) マウス作成による機能解析」と「相同組換え頻度検出マウス作成による抑制因子の探索」の2点について結論を出すことを目標とした。まずPrdm9 KIマウスについては繁殖率が悪く、個体数を増加させることに専念した。その後、低繁殖率と精巣の減数分裂進行の関連性を明らかにするため、免疫染色による精巣由来の精原細胞と減数分裂中の精母細胞の観察を行った。結果、KI マウスでは染色体の対合が不完全となり、減数分裂に異常が生じていた。この原因としてPrdm9タンパク質のC-末端に付加したタグ配列が、Zinc Finger Array (ZFA) 領域と干渉している可能性が考えられた。また変異lox配列を利用したKIマウス受精卵に対するインジェクションによるZFAの入れ換えも試みたが失敗した。加えて、ヒト化Prdm9によるマウス生殖能の回復実験は競合するグループに先行されたため中止した。次に相同組換え頻度検出マウスの解析を行った。当初、プロモーターと、レポーターとなるEYFPをコードしている領域は分割されていると考えられたが、プロモーター配列がレポーター領域に部分的に残存していることが判明した。そこで精子蛍光による相同組換えの検出は困難と判断し、ゲノムDNAを用いたPCRによる検出を試みた。検出系統の精巣由来ゲノムDNAを用いたところ、大半の系統では相同組換えが検出されたのに対し、一部の系統では検出されなかった。この結果は同一の組換えホットスポット配列であっても、ゲノム上の位置次第でPrdm9以外の因子により組換え頻度が変化することを示しており、組換え抑制因子の存在を支持するものであると考えられる。今後は相同組換え検出マウスによる組換え頻度の測定法に改良を施し論文を作成する予定である。

This year, the final year of the study,"Prdm9 Knock In (KI)","Prdm9 Knock In (KI),","Prdm 9 Knock In (KI Prdm9 KI is the most important factor in increasing the reproduction rate and the number of individuals. The relationship between low reproduction rate and meiosis progression of spermatozoa was studied by immunostaining and observation of spermatogonia in meiosis. As a result, KI The reason for this is that Prdm9 is the C-terminal of the substance, and the Zinc Finger Array (ZFA) is the domain of the substance. ZFA failed in the process of fertilization. The first step is to restore reproductive function. The frequency of the same group is detected. In the beginning, the EYFP was divided into two parts: the first part and the second part. It is difficult to judge whether the sperm is in the same group or not, and it is necessary to use PCR to detect the sperm. The essence of the system must be used in the middle of the system. Most of the systems are the same. Some systems are the same. The results show that the frequency of the same group of factors other than Prdm9 is supported by the existence of the group of inhibition factors. In the future, the method of determining the frequency of the change is improved.