がん細胞の不均一性からみた、双方向的ＥＭＴ制御系による悪性化基盤形成機構の解明

从癌细胞异质性角度阐明双向EMT控制系统恶变机制

• 批准号: 13J10159
• 负责人: 加藤 真一郎
• 金额: $ 1.32万
• 依托单位: University of Toyama
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J10159/
• 关键词: 上皮間葉転換; 細胞間相互作用; 転移; WNT; CTGF; がん細胞の不均一性; 浸潤

上皮間葉転換（Epithelial-to-Mesenchymal Transition: EMT）は腫瘍組織内部において不均一に誘導されている。本研究課題では『EMTを起こしたがん細胞』と『EMTを起こしていないがん細胞』の間のクロストークによってEMTが双方向的に制御されることを明らかにするために、平成２５年度にEMTを正に制御する因子としてWNT3、WNT5Bが分泌されることを見出し、『EMTを起こしていないがん細胞』に対してWNT依存的EMTを誘導すること、転移能が亢進されることを明らかにした。平成２６年度は本研究課題にある「双方向性」を示すために、EMTを負に制御する液性因子の同定を目指した。TGF-betaによってEMTを誘導したヒト肺癌細胞株A549（M-A549）を用いて、培養上清を作製したところ、この培養上清はM-A549自身にEMTとは逆の現象であるMETを誘導する液性因子が含まれることを見出した。さらに、その液性因子を同定するために、intactのA549に比べてM-A549で発現および分泌亢進している遺伝子群をバイオインフォマティクスの手法（GSEA）によって探索したところ、Connective Tissue Growth Factor（CTGF）が見出された。さらに、CTGFに対するsiRNAもしくは中和抗体によって培養上清が持つMET誘導能がキャンセルされ、リコンビナントCTGFの単独処理によってMETが誘導されたことから、CTGFがEMTを負に制御するMET誘導因子となりうることが示された。さらにそのメカニズムとしてCTGFがp38MAPKを抑制することで、METを誘導することを明らかにした。以上のことから、『EMTを起こしたがん細胞』が産生する液性因子によって、周辺のがん細胞のEMTが動的に制御されうることが初めて明らかになった。

上皮到间质转变（EMT）在肿瘤组织内诱导。在该研究主题中，为了澄清EMT在“引起EMT”的癌细胞和“未引起EMT的癌细胞”之间的串扰在双向控制，我们发现Wnt3和Wnt5b被分泌为在2013年积极调节EMT的因素，并揭示了依赖于Wnt依赖于cance and IS cancy IS的EMT的因素。在2014年，为了证明这是本研究主题的“双向”，我们旨在确定对EMT负面调节的体液因素。当使用人类肺癌细胞系A549（M-A549）制备培养上清液，该细胞通过TGF-beta诱导EMT时，发现培养上清液中含有M-A549本身，具有诱导Met的体液因子，这是EMT的相反现象。此外，为了识别体液因素，与完整的A549相比，使用生物信息学技术（GSEA）搜索了M-A549中表达的一组基因，并发现了结缔组织生长因子（CTGF）。此外，针对CTGF的siRNA或中和抗体取消了培养上清液的MET诱导能力，并且通过单独使用重组CTGF处理来诱导MET，这表明CTGF可能是MET诱导者，对EMT进行负调节。此外，揭示了CTGF通过抑制p38mapk作为一种机制而诱导的。从上面的角度来看，首次揭示了周围癌细胞中EMT可以由经过EMT的癌细胞产生的体液因子动态控制。

项目成果

Mesenchymal-transitioned cancer cells instigate surrounding c ancer cells to metastasis via secretion of WNT lieands

间充质转化癌细胞通过分泌 WNT 类物质促使周围癌细胞转移

• 发表时间: 2013
• 作者: 加藤 真一郎;横山 悟;早川 芳弘;済木 育夫
• 通讯作者: 済木 育夫