細胞系譜特異的ながん細胞増殖を制御する長鎖ノンコーディングRNAの機能解析

控制细胞谱系特异性癌细胞增殖的长非编码RNA的功能分析

• 批准号: 22K07148
• 负责人: 加藤 真一郎
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07148/
• 关键词: ロングノンコーディングRNA; メラノサイト; 色素細胞; メラノーマ; MITF; ノンコーディングRNA

メラノサイト細胞系譜の発生・分化・生存に必須の転写因子MITFによる細胞系譜特異的な増殖機構（lineage dependency）の本態解明に向けて、メラノサイト細胞系譜特異的なロングノーコンディングRNA（long non-coding RNA: lncRNA）の同定と機能解析を基軸とした研究を遂行した。特に、MITFによって直接転写制御される18種類のlncRNAのうち、新規性が高く、メラノサイトやメラノーマの生存・増殖においてロバストな機能を持つ「lncRNA X」に着目し、その未知なる分子的特性や細胞内局在の詳細な解析を行なった（lncRNA Xは霊長類でのみ発現が確認されている）。近年、lncRNAに含まれるORFから生理活性ペプチドが翻訳されることが様々な生物種で報告されているが、FLAGタグを付加したlncRNA Xを用いた分子生物学的解析や質量分析解析により、lncRNA Xの推定ORFは翻訳されることなくlncRNAのまま機能すると考えられた。さらに、lncRNA Xの細胞内局在についてRNA FISHによる検討を行なったところ、細胞周期依存的に細胞内局在が変化するという興味深い現象が観察された。また、RNA-seqおよび質量分析解析を用いた網羅的な遺伝子・タンパク質発現解析により、lncRNA Xのノックダウンによって細胞周期のG2/M transitionに関連する転写因子AやキナーゼBの発現が有意に低下していたことから、lncRNA Xは細胞周期依存的にその局在を変化させ、直接的・間接的にメラノサイト細胞系譜の細胞周期を制御することが示唆された。以上のことから、MITFによるメラノサイト細胞系譜のlineage dependencyの一端には、lncRNA XによるG2/M細胞周期制御が必要となることが明らかとなった。

本研究通过MITF细胞系谱系依赖性的发现机制（lineage dependency）阐明了谱系依赖性的发现机制，并对非编码基因的非编码基因的表达进行了研究。特别是，MITF基因组克隆orm直接编写的18种新的lncRNA克隆，新的特异性高表达，能够存活·发现新的克隆orm基因组克隆，能够维持“lncRNA X”的目标，识别未知突变子的特性，细胞内局在基因组克隆解译进行测序（lncRNA X基因组克隆）。近年来，lncRNA含有寡核苷酸ORF的生物活性检测试剂盒被广泛应用于生物学检测试剂盒，FLAG抗体添加剂lncRNA X利用寡核苷酸分子生物学的解析量分析解析申请，lncRNA X确定ORF的特异性引物，lncRNA的特异性引物，lncRNA的特异性引物，lncRNA的特异性引物，lncRNA的特异性引物。荧光素酶、lncRNA X荧光细胞内局在荧光定量RNA FISH检测中进行荧光定量检测，细胞周期依赖的荧光细胞内局在荧光化修饰的寡核苷酸探针中检测到深度荧光现象。RNA，RNA-seq测序量分析解析低用寡核苷酸的寡核苷酸子·寡核苷酸序列分析解析寡核苷酸申请，lncRNA X寡核苷酸序列分析正常细胞周期G2/M过渡期转录因子A突变体B突变体有意识地下调正常细胞序列，lncRNA X寡核苷酸细胞周期依赖的寡核苷酸局在寡核苷酸化修饰，直接的·间接的免疫缺陷病毒诱导的淋巴细胞系淋巴细胞周期制免疫缺陷病毒呈阳性表达。以上均为非典型肺炎，MITF非典型肺炎，MITF细胞系非典型性谱系依赖性一端依赖性，lncRNA X非典型性G2/M细胞周期制依赖性必需的非典型性显性遗传。