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エピブラストにおける維持・分化制御機構の解明

阐明外胚层的维持和分化控制机制

基本信息

批准号：
13J06969
负责人：
長谷川輝
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Tottori University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J06969/
关键词：
オーガナイザーエピブラスト ES細胞 3胚葉分化原条形成原条 EpiS細胞

项目摘要

マウス初期胚に発生するエピブラストは、3胚葉のそれぞれの直接の起源であるが、エピブラストの維持・分化制御機構にあたる分子基盤はあまり解明されていない。私たちは、マウスES細胞を使用し、エピブラストの分子基盤に関係する遺伝子としてLIM homeobox1 (Lhx1)を同定した。私たちは、エピブラストの特徴を持つP19細胞でLhx1過剰発現実験を行った。結果は、オーガナイザー、中、内胚葉マーカーの発現が有意に上昇したことが分かった。次に、Lhx1をノックダウン（KD）させたマウスES細胞、Lhx1-KD ES細胞株を樹立し、胚様体を作製した。3日目では、オーガナイザーマーカーの発現が有意に抑制され、5日目では、中、内胚葉マーカーの発現が有意に抑制されていた。更に、Lhx1遺伝子座にGFPをノックイン（KI）した、Lhx1-KI ES細胞株を樹立した。そして、胚様体3日目と5日目でソーティングを行った。その結果、3日目では、陽性細胞群でオーガナイザーマーカーの発現が確認され、中内胚葉マーカーのCXCR4とGFPの両陽性群が約8割を占めていた。5日目では、GFP陽性細胞群で中、内胚葉マーカーの発現が確認され、CXCR4/GFP両陽性群は減少した一方で、GFP陽性群に中胚葉マーカーPDGFRα、内胚葉マーカーDAF1、それぞれの陽性群が見られた。これらの結果から、①Lhx1はエピブラスト形成時に発現すること、②Lhx1過剰発現は、P19細胞を中内胚葉へ分化誘導すること、③ES細胞の分化誘導において、Lhx1の抑制は中内胚葉分化を妨害すること、④Lhx1陽性細胞は、オーガナイザーマーカーの発現を示し、その後、中内胚葉マーカーを示すこと、これら4つを明らかにした。つまり、Lhx1がエピブラストからオーガナイザーの形成及び3胚葉分化の制御因子として働いていることがわかった。

In the early stage of the disease, the embryo was born in the early stage, the mother was born in the early stage, the mother was born in the first place, the mother was born in the first place, and the differentiation was controlled by the molecular basis of the differentiation mechanism. the molecular basis was used to understand the disease. The private ES cell uses the same level of information as the LIM homeobox1 (Lhx1), which is based on the molecular basis. Private and private employees are required to hold the P19 cell Lhx1 filter to obtain financial assistance. Results the results showed that there was an increase in the incidence of dysplasia in the mesoderm and endodermis. Secondary, Lhx1 cells were isolated (KD) cells were isolated from ES cells, Lhx1-KD ES cell lines were isolated and embryo bodies were used as cotyledons. 3-day, 5-day, 3-day, 5-day, The cell lines of Lhx1, GFP, Lhx1-KI ES, and Lhx1-KI ES were isolated, respectively. The body of the embryo, the embryo, the body of the embryo, the embryo and the embryo. The results of the experiment, the results of the 3-day cycle, the number of sexual cells, the number of CXCR4 cells, the number of sexual cells, and the number of mesoendoderm cells were confirmed, and about 8% of them were found in the sex group. On the 5th, the mesoderm, endodermis, endodermis, CXCR4/GFP, GFP, endoderm and DAF1 were confirmed, CXCR4/GFP, PDGFR, DAF1 and Daf1, respectively. The results of the experiment, the formation time of 1Lhx1, 2Lhx1, the differentiation of endodermis in P19 cells, the differentiation of endodermis of P19, the differentiation of endodermis of P19, the inhibitory effect of Lhx1 on the differentiation of endodermis, the inhibition of endodermis differentiation, the inhibition of endoderm differentiation, the inhibition of endodermis differentiation, the inhibition of endoderm differentiation, the inhibition of endodermis differentiation, the I don't know if I can tell you what to do. The factors controlling the formation and differentiation of embryos in the first place, such as the formation of embryos and the differentiation of embryos, are the most important factors in the formation and differentiation of embryos. The factors controlling the formation and differentiation of embryos are the control factors of Lhx1 formation and differentiation of embryos.