ムチン型糖鎖転移酵素ＧＡＬＮＴ３によるインフルエンザウイルス増殖制御機構の解明

阐明粘蛋白型糖基转移酶 GALNT3 控制流感病毒生长的机制

• 批准号: 13J05979
• 负责人: 中村 祥子
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J05979/
• 关键词: インフルエンザウイルス; ムチン; GALNT3; ノックアウトマウス; ウイルス感染; 肺組織; 気管支上皮細胞; O型糖鎖; ゲノム転写・複製; miRNA; 糖鎖

昨年度までの研究では、Galnt3ノックアウトマウスからマウス胎児繊維芽細胞（MEF細胞）を用いたA型インフルエンザウイルス感染実験においてウイルス遺伝子とウイルス力価の両者ともに有意に減少し、Galnt3がウイルスの複製を促進する可能性を見出した。今年度の研究では、主にGalnt3ノックアウトマウスにA型インフルエンザウイルスを経鼻感染した時のウイルス増殖動態とマウス肺の組織学的変化について検討した。PR8株（H1N1）を野生型マウスに接種しウイルス感染から10日間毎日感染マウスから肺と気管を取り出し組織を分散した後、肺胞上皮細胞と気管支上皮細胞を分離した。この細胞を溶解しウエスタンブロット法を用いてタンパク質の発現を定量した。その結果、感染4日目までは加速的にGalnt3の発現が上昇し、その後、徐々にその発現が上昇し続けた。同時に、A型インフルエンザウイルスの核タンパク質（NP）の発現変化も検討したところ、感染7日目まで顕著に発現上昇したが、その後徐々に発現が低下した。さらに、ウイルス感染した肺をホモジナイザーですり潰し、フォーカス法によりウイルス力価を測定した。その結果、感染3日目まではGalnt3ノックアウト型と比較して野生型ではウイルス力価が有意に上昇したが、感染4日目以降は、ノックアウト型について顕著に上昇することが分かった。また、感染3日目と6日目の肺をブアン液で固定し、HE染色法を用いてマウス肺を組織染色して肺組織の炎症進度をスコア化した。結果、感染6日目のノックアウト型について血管変性と炎症性細胞の浸潤が顕著に認められた。以上の結果から、Galnt3は、ウイルス感染初期段階ではウイルスを増殖する方向に働きかけ、感染後期にかけてウイルス増殖を抑制する機能を担うことが示唆された。これは、組織染色の解析による結果からも同様に考えられる。

Yesterday's annual research project, Galnt3 research project Fetal embryonic fibroblast cells (MEF cells) used Infectionともに有purpose Reduce し、Galnt3 がウイルスのreplication をpromote するpossibility を见出した. This year's research project, Main Galnt3 Novel A Type A Novel The symptoms of nasal infection are related to the proliferation dynamics of the lungs and the histological changes of the lungs. The PR8 strain (H1N1) was inoculated with wild-type Malus and infected with Malus every day for 10 days. After extracting and dispersing the tissue from the lungs and ducts, the lung epithelial cells and duct branch epithelial cells were separated. The cell lysis method is used to quantify the cell lysis method.そのresult, にGalnt3 の発appears がRISE し, その后, Xu々にその発appears がRISE し続けた which is accelerated by infection 4th day. At the same time, the type A nuclear material (NP) has been modifiedたところ, 7 days after infection, the まで顕上に発 is now rising したが, and the その后 Xu 々に発 is now low した.さらに、ウイルス infected したlung をホモジナイザーですりIt is measured by the Fukuro method and the Fukuro method.そのResults, Infection 3 Day Eyes まではGalnt3 ノックアウトType とComparison してWild Type ではウイルス力価がIntentional rising of the virus, infection falling after 4 days of infection, and infection of the infection type falling after 4 days of infection. On the 3rd day of infection and on the 6th day of infection, the lung tissue was fixed with liquid, and the HE staining method was used to stain the lung tissue to determine the inflammation progress of the lung tissue. As a result, on the 6th day of the infection, the infection was confirmed to be caused by vascular damage and infiltration of inflammatory cells. The results of the above are the direction of the initial stage of infection, Galnt3, and infection.に働きかけ, infection late stage にかけてウイルス multiplying を inhibits する function を dan う こ と が う さ れ た.これは、Tissue staining analysis and results からも同様に考えられる.

项目成果

ボルナ病ウイルスNタンパク質のアンキリン配列を介したNF-kB活性化阻害

通过博尔纳病病毒 N 蛋白的锚蛋白序列抑制 NF-kB 激活

• 发表时间: 2013
• 作者: 牧野晶子;藤野寛;惣福梢;中村祥子;本田知之;朝長啓造
• 通讯作者: 朝長啓造

Identification of host factors interacting Borna disease virus ribonucleoprotein in the nucleus

细胞核中与博尔纳病病毒核糖核蛋白相互作用的宿主因子的鉴定

• 发表时间: 2014
• 作者: Honda T; Makino A;Nakamura S;Tomonaga K
• 通讯作者: Tomonaga K

ムチン型糖転移酵素Galnt3ノックアウトマウスを用いたA型インフルエンザウイルス感染動態の解析

粘蛋白型糖基转移酶 Galnt3 敲除小鼠分析甲型流感病毒感染动态

• 发表时间: 2015
• 作者: Shoko Nakamura;Tomo Daidoji;Tomoyuki Honda;Takaaki Nakaya;Toshihisa Komori;Keizo Tomonaga
• 通讯作者: Keizo Tomonaga

The regulation and functional significance of GALNT3 expression during influenza A virus infection

甲型流感病毒感染过程中GALNT3表达的调控及功能意义

• 发表时间: 2014
• 作者: 〇Shoko Nakamura;Masayuki Horie;Mayo Yasugi;Tomo Daidoji; Atsushi Kuno;Daisuke Okuzaki;Akiko Makino;Tomoyuki Honda;Hisashi Narimatsu;Takaaki Nakaya;Keizo Tomonaga
• 通讯作者: Keizo Tomonaga

Inhibition of NF-kB activation by peptide derived from nucleoprotein of Borna disease virus

博尔纳病病毒核蛋白衍生肽对 NF-kB 活化的抑制

• 发表时间: 2013
• 作者: Akiko Makino;Kan Fujino;Yuya Hirai;Kozue Spfuku;Shoko Nakamura;他3名
• 通讯作者: 他3名