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大気圧プラズマジェットを用いた細胞内への新規タンパク質導入法の確立

建立利用大气压等离子体射流将蛋白质引入细胞的新方法

基本信息

批准号：
13J00115
负责人：
高村紀充
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究課題の実現により、iPS細胞の作製や分化など、医療・バイオ分野への貢献が期待できる。以下に、本年度実施した研究実績の概要を記す。・大気圧プラズマジェット（PJ）の照射によるHeLa細胞内へのGFP-NLS導入：HeLa細胞にPJを照射し、GFP-NLSを細胞内に効率よく導入することを目的とした実験を行った。その結果、PJの照射により細胞死を引き起こすことなくHeLa細胞内にGFP-NLSを効率よく導入することができた。また、PJを照射してもGFP-NLSの主な機能である緑色蛍光性と核移行性が維持されることがわかった。・誘電体材質の違いによるPJへの影響：ガラス管とアルミナ管を用いてPJを生成し、各PJで生成される活性種の種類や量に違いが見られるか調査した。その結果、励起状態粒子の種類に違いは見られなかったが、アルミナ管を用いた方が全体的な発光強度が強く、励起状態粒子の生成量が多くなることがわかった。また、アルミナ管を用いた方が電界の時空間分布が大きくなることが示唆された。・PJへの水分添加による細胞への影響：乾燥PJ（DPJ）とミストPJ（MPJ）を細胞に照射し、細胞に異なる影響を与えるかどうかを調査した。その結果、MPJではOHラジカルやH2O2の生成量が増加することが示唆され、タンパク質導入研究において、照射時間の短縮などが期待できることが示唆された。また、PJは直接的に細胞死を引き起こすよりも、培地を介して二次的に細胞死を引き起こす可能性が高く、特に、MPJを照射した場合には培地を介した二次的な反応が細胞死を引き起こす主な要因となることがわかった。・PJへの水分添加による細胞培地への影響：DPJとMPJを照射した培地のpH、導電率、温度の変化を調査した。その結果、これら個々の影響による細胞死誘発の可能性は低いことがわかった。

This research project is expected to contribute to the development, differentiation and differentiation of iPS cells. The following is a summary of the results of the research conducted during the year. GFP-NLS is introduced into HeLa cells under irradiation of PJ: PJ is irradiated into HeLa cells, GFP-NLS is introduced into HeLa cells under irradiation of PJ, and GFP-NLS is introduced into HeLa cells. As a result, PJ was irradiated into HeLa cells and GFP-NLS was introduced. The main function of GFP-NLS is to maintain the green fluorescence and nuclear migration. The influence of the material of the inductor on the PJ content is investigated. The PJ content is determined by the type and quantity of the active species generated by the PJ. As a result, the type of excited state particles is different from the type of excited state particles. The intensity of the emitted light is strong and the amount of excited state particles is large. The time-space distribution of the electric field is large, and the electric field is large. Effects of moisture addition on PJ cells: Dry PJ (DPJ) and dry PJ (MPJ) were investigated. As a result, the amount of OH and H2O2 produced by MPJ increased, which indicated that the irradiation time was shortened during the study of mass introduction. The possibility of direct cell death is high, especially in the case of MPJ irradiation, and the possibility of direct cell death is high. Effects of moisture addition on cell culture: pH, conductivity and temperature of cell culture under DPJ and MPJ irradiation were investigated. The probability of cell death is low.