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ウシ黄体の形成機構に関する研究：黄体細胞の増殖および分化調節メカニズムの解明

牛黄体形成机制研究：阐明黄体细胞增殖分化调控机制

基本信息

批准号：
13J00612
负责人：
吉岡伸
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo (2014)Okayama University (2013)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

哺乳動物において排卵後に形成される黄体は、妊娠を成立・維持するために必須の内分泌器官である。申請者らはこれまで黄体形成過程が黄体内ステロイド合成細胞(LSC)の増殖と肥大から成ること、これらが細胞周期制御因子の制御を受けていること、さらにHippo signalが黄体の形成過程において重要な役割を果たす可能性および黄体機能を調節する可能性を示した。このHippo signalと黄体形成および黄体機能の関係を詳細に調べるために、分子生物学的な手法を駆使して検討を試みたが、初代培養細胞であるLSCへはコントロールベクターも含め、遺伝子導入条件は見出せなかった。このことに加え、in vitroの実験系では実際に生体内で起きる現象を明らかにすることが難しいため、マウスをモデルとして黄体形成とHippo signal の関連について明らかにすることを目的に本年度の研究を実施した。生体を用いて特定の組織における遺伝子機能を明らかにするためには、部位特異的で効率的な遺伝子改変技術が重要である。最近、CRISPR/Cas9 system を用いて簡便に効率よく全身性の遺伝子改変動物の作出できることが報告されているが、CRISPR/Cas9 system を応用して部位特異的な遺伝子改変を行うためには看過できない問題点がある。すなわち、CRISPR/Cas9 systemの構成因子であるgRNAを部位特異的な発現に適したRNA polymerase(RNAP) II promoterで発現誘導することで機能消失してしまう点である。この問題点を解決するために自己切断能を持つリボザイムを活用し、RNAP II promoterを用いても機能的なgRNAを発現させること、さらにこれまではgRNAとCas9 を別々のプロモーターで発現させる必要があったが、一つのプロモーター制御下でgRNAおよびCas9 の両方を同時に発現させる系を確立し、培養細胞レベルで実用可能であることを示した。今後はこの技術を活用して、部位特異的な遺伝子改変動物の作出を行う予定である。

In mammals, the corpus luteum is formed after ovulation, and the endocrine organs are necessary for pregnancy establishment and maintenance. The applicant indicated the possibility that the process of corpus luteum formation could be regulated by the proliferation and hypertrophy of luteal cells (LSC), the regulation of cell cycle control factors, and the Hippo signal as an important part of corpus luteum formation. The relationship between the Hippo signal and luteal formation and luteal function was studied in detail. The molecular biological methods were used to investigate the relationship between luteal formation and luteal function. The conditions for introducing LSC into primary cultured cells were discussed. This year's study was carried out on the relationship between Hippo signal and the occurrence of the phenomenon in vivo. It is important to understand the gene function of specific tissues in organisms and to modify the gene function of specific tissues. Recently, CRISPR/Cas9 system has been used to improve the efficiency of systemic gene modification in animals. The CRISPR/Cas9 system is composed of components that allow site-specific expression of gRNA and induction of RNA polymerase(RNAP) II promoter. This problem is solved by using RNAP II promoter to detect gRNA and Cas9 respectively. It is necessary to detect gRNA and Cas9 at the same time. It is necessary to establish and culture cell culture system. In the future, the technology will be used to modify the behavior of animals with specific parts.