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ｉＰＳ細胞から誘導した角膜内皮及び上皮細胞シートのバリデーション評価法の確立

iPS细胞来源的角膜内皮和上皮细胞片验证评价方法的建立

基本信息

批准号：
13F03103
负责人：
西田幸二
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

近年、ドナー不足や拒絶反応等の問題を抱える角膜移植に代わり、角膜へ細胞シートを移植する治療法が注目を集めている。それに伴い、細胞シートの品質を今以上確かに検証できる評価システムの構築が強く求められる。本研究課題では、光学・構造学的に細胞シートの品質を評価できる新技術の開発を行った。具体的には、半導体ナノ粒子である蛍光性量子ドット水溶液を用い、細胞シートに滴下することで、量子ドットの細胞シートへの浸潤具合を、共焦点レーザー蛍光顕微鏡等で観察し、定量的・定性的にタイトジャンクションの機能評価（バリア機能評価）を行った。結果として、免疫染色による所定のマーカーの発現およびTEER測定により、質の良さを確認した培養口腔粘膜および培養角膜上皮細胞シートについては、量子ドットは細胞シート内にほぼ浸潤しないことが、共焦点レーザー顕微鏡観察から明らかとなった。一方で、カルシウムキレート剤でタイトジャンクションの結合機能を弱めた同細胞シートについては、量子ドットの細胞シート内部への高い浸潤が見られた。タイトジャンクションの機能（バリア機能）に基づく細胞シートの品質の良し悪しを、量子ドットの浸潤の程度から判断できることが明らかとなった（Duncan et al, IOVS,56,2215,2015 に報告）。本評価法をiPS細胞から誘導した角膜上皮細胞シートに対して実施した結果、量子ドットが細胞シート内に浸潤しなかったため、良質な細胞シートが作製できていることが分かった。今後更なる詳細検証を進めていくと共に、iPS細胞から誘導した角膜内皮細胞シートについても検証を進める予定である。本研究課題の遂行により、角膜移植用の細胞シートの新規な品質評価法を確立することができた。iPS細胞から誘導した細胞シートにおける品質評価法に、ひとつの目途を付けることができたと考えており、十分な成果を得ることに成功したと考えている。

In recent years, there have been problems such as insufficient corneal transplantation and rejection of corneal transplantation. The quality of the cells and the quality of the cells are now confirmed. The quality of the cells is evaluated. This research topic is to evaluate the quality of optical and structural cells and to develop new technologies. Specifically, the semiconductor particles are used in aqueous solutions of optically active quantum particles, the cells are dripped, the cells are infiltrated, confocal microscopy, etc., and quantitative and qualitative functional evaluation of the quantum particles is performed. Results: Immunostaining and TEER assay confirmed the presence and quality of the identified cells in cultured oral mucosa and cultured corneal epithelial cells. The combination function of a single cell and a quantum cell is weak, and the high degree of infiltration of the cell interior is visible. The quality of the basic cells and the degree of infiltration of the quantum cells are judged according to the function of the crystal (Duncan et al, IOVS,56,2215,2015). The method of this paper is to induce corneal epithelial cells to infiltrate and control the cells. In the future, more detailed evidence will be obtained, iPS cells will be induced, corneal endothelial cells will be induced, and evidence will be determined. This research project was carried out to establish a new quality evaluation method for corneal transplantation cells. iPS cell induction and quality evaluation method, and the goal of the test, very successful test