網膜特異的転写因子の遺伝子導入による神経幹細胞の網膜細胞への分化誘導に関する研究

视网膜特异性转录因子基因转移诱导神经干细胞分化为视网膜细胞的研究

• 批准号: 13877289
• 负责人: 西田 幸二
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13877289/
• 关键词: 神経幹細胞; 転写因子; 網膜; 遺伝子導入; 視細胞; レトロウイルスベクター

成体ラット海馬由来の神経幹細胞(AHPS、米国のソーク研究所Gage博士より供与)が網膜細胞へ分化するか否かを検討した。前年度の結果から、転写因子の導入のみでは、脳の神経幹細胞は網膜細胞に分化しないことが示され、何らかの環境因子(たとえば発生期の眼内の環境)が必要であることが示唆された。今回、AHPSにレトロウイルスペクターでeGFPのみ、eGFPとCRX, NRL, RX, PAX6を持続的に発現するAHPS細胞株を樹立した。この細胞を血清とレチノイン酸で分化誘導させたときの網膜細胞のマーカーの発現を検討したが、いずれの細胞株も網膜細胞のマーカーを発現しなかった。つぎに、これらの細胞株と胎生期の網膜細胞と混合し、ペレット状にして培養した。2週間培養後、ペレットをばらばらにして、AHPSがロドプシンなど網膜細胞のマーカーを発現していないかを免疫化学的に検討した。その結果、非常に少数ながら、ロドプシン発現陽性のAHPS細胞がみられるようであったが、遺伝子発現レベルなどでさらに検討が必要であった。これらの結果から、AHPSは視細胞へ分化しないか、あるいは特殊な環境でのみ分化する可能性が示唆された。

Adult hippocampus derived neural stem cells (AHPS, Dr. Gage, U.S. Institute of Technology) and retinal cell differentiation are discussed. The results of the previous year showed that the introduction of factors into the brain was necessary for the differentiation of neural stem cells and retinal cells. AHPS cell lines were established for the ongoing development of eGFP, eGFP CRX, NRL, RX, PAX6. The cells were cultured in vitro and induced to differentiate into retinal cells. The cell lines were cultured in a mixed culture at the embryonic stage. After 2 weeks of culture, AHPS cells were detected by immunochemical assay. As a result, a very small number of AHPS cells were found to be positive, and a small number of AHPS cells were found to be positive. The results show that AHPS is sensitive to cell differentiation and the possibility of differentiation in a particular environment.

项目成果

西田 幸二: "組織工学による角膜再生治療と遺伝子治療"眼紀. 53. 1000-1003 (2002)

Koji Nishida：“利用组织工程的角膜再生疗法和基因疗法”《眼科杂志》53. 1000-1003 (2002)。