ROLE OF THE NIM-A GENE IN MITOTIC REGULATION
NIM-A 基因在有丝分裂调节中的作用
基本信息
- 批准号:3301221
- 负责人:
- 金额:$ 14.92万
- 依托单位:
- 依托单位国家:美国
- 项目类别:
- 财政年份:1989
- 资助国家:美国
- 起止时间:1989-07-01 至 1992-06-30
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:Aspergillus Xenopus alleles enzyme mechanism eukaryote gene expression genetic manipulation genetic promoter element genetic regulation genome immunoprecipitation microinjections molecular cloning molecular genetics nucleic acid hybridization nucleic acid sequence open reading frames protein kinase tissue /cell culture
项目摘要
Recent work utilizing the cell cycle specific protein kinase (nimA)
of Aspergillus nidulans has lead to the formulation of a model to
describe the regulation of mitosis in this species (Osmani et at.,
1988b). The model proposes that cell cycle specific expression of
nimA drives the mitotic cycle. This proposal is aimed at testing
and expanding this model and at establishing to what extent the
model is applicable to other systems.
We will complete the molecular characterization of the nimA gene
by sequencing the wild type genomic locus of nimA and obtain the
sequence of the mutant alleles of this gene. These data will be
required for subsequent manipulations of the gene and identify
important residues in the nimA protein responsible for temperature
sensitivity. We intend to carry out in vitro mutagenesis to modify
the catalytic protein kinase site of the nimA gene and test its
functional significance by introducing the mutated gene back into
Aspergillus such that a functional analysis can be carried out in
vivo. This approach will establish the importance of the protein
kinase potential of the nimA gene. As cell cycle specific
expression of nimA has been proposed to drive the mitotic cycle we
will determine at what level the cell cycle specific expression of
nimA is under control. These experiments will also ascertain the
functional importance of cell cycle specific expression of nimA and
determine if negative translational control is mediated by the 5'
small open reading frames found in the nimA mRNA.
Antibodies to the nimA protein are to be elicited and affinity
purified and used to reveal the degree of conservation of the nimA
protein in other eukaryotes. The antibodies will also be used to
establish the sub-cellular location of the protein, to study the
cell cycle specific variation in nimA protein abundance and protein
kinase catalytic capacity, and to immunoprecipitate proteins
associated with nimA protein. We intend to purify nimA protein
from strains of Aspergillus that overexpress the nimA protein. The
purified nimA protein and nimA specific antisera are to be used to
establish the relationship between nimA and maturation promotion
factor (MPF) by micro injection experiments in Xenopus oocytes.
利用细胞周期特异性蛋白激酶(nimA)的最新工作
构巢曲霉的研究导致了一种模型的形成,
描述了该物种中有丝分裂的调节(Osmani等,
1988年b)。 该模型提出,细胞周期特异性表达
nimA驱动有丝分裂周期。 这项提议旨在测试
并扩大这一模式,并在多大程度上建立
模型适用于其他系统。
我们将完成nimA基因的分子表征
通过对nimA的野生型基因组位点进行测序,
该基因的突变等位基因的序列。 这些数据将
所需的后续操作的基因和鉴定
nimA蛋白中负责温度的重要残基
灵敏度 我们打算进行体外诱变,
nimA基因的催化蛋白激酶位点,并检测其
通过将突变的基因引入
曲霉属,使得可以在其中进行功能分析。
vivo. 这种方法将确立蛋白质的重要性
nimA基因的激酶潜力。 作为细胞周期特异性
已经提出nimA的表达驱动有丝分裂周期,
将决定细胞周期特异性表达的水平,
尼米在控制之中。 这些实验还将确定
nimA的细胞周期特异性表达的功能重要性,
确定负翻译控制是否由5'端
在nimA mRNA中发现的小开放阅读框。
将引发针对nimA蛋白的抗体,并且亲和力
纯化并用于揭示nimA的保守程度
其他真核生物中的蛋白质。 这些抗体还将用于
建立蛋白质的亚细胞定位,以研究
nimA蛋白丰度和蛋白质的细胞周期特异性变化
激酶催化能力和免疫沉淀蛋白质
与nimA蛋白相关。 我们打算纯化nimA蛋白
来自过表达nimA蛋白的曲霉菌株。 的
纯化的nimA蛋白和nimA特异性抗血清将用于
建立nimA与成熟促进的关系
通过卵母细胞显微注射实验,研究了MPF因子在非洲爪蟾卵母细胞中的作用。
项目成果
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