GENETIC AND IMMUNOLOGIC ANALYSIS OF A NOVEL REGULATORY MEMBRANE PROTEIN
新型调节膜蛋白的遗传和免疫学分析
基本信息
- 批准号:3963229
- 负责人:
- 金额:--
- 依托单位:
- 依托单位国家:美国
- 项目类别:
- 财政年份:
- 资助国家:美国
- 起止时间:至
- 项目状态:未结题
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- 关键词:
项目摘要
The identification of ARF, a component of the adenylate cyclase system, as
a GTP-binding regulatory protein is of considerable interest due to the
similarities between ARF and the products of the ras oncogene (molecular
mass, membrane location, GTP binding characteristics). In addition,
expression of ras proteins has profound effects on cyclic nucleotide levels
in some systems. ARF was purified from bovine brain membranes. Cyanogen
bromide fragments of the pure protein were separated and two amino acid
sequences of about 25 residues each were obtained. Synthetic peptides were
synthesized for injection into rabbits to produce specific antibodies to
ARF. Oligonucleotide probes were also synthesized from the amino acid
sequence and are being used to screen a cDNA library to obtain the full
length sequence of ARF. These antibody and cDNA probes should help to
identify the site and physiological role of this novel membrane protein.
Comparison of the primary and predicted tertiary structure of ARF to other
recently cloned G-proteins may aid in the identification of specific
domains involved in binding other proteins or binding and hydrolyzing GTP.
In this case, site-directed mutagenesis will be used to construct specific
altered proteins to test for cellular functions of ARF.
ARF是腺苷酸环化酶系统的一个组成部分,
GTP结合调节蛋白是相当大的兴趣,由于
ARF和ras癌基因产物之间的相似性(分子
质量、膜位置、GTP结合特性)。 此外,本发明还提供了一种方法,
ras蛋白的表达对环核苷酸水平有深远的影响
在某些系统中。 从牛脑膜中纯化ARF。 氰
分离出纯蛋白的溴片段,并将两个氨基酸
获得每个约25个残基的序列。 合成肽
合成用于注射到兔子体内,以产生特异性抗体,
ARF。 寡核苷酸探针也从氨基酸合成
序列,并被用来筛选cDNA文库,以获得完整的
ARF的长度序列。 这些抗体和cDNA探针应该有助于
确定这种新的膜蛋白的位点和生理作用。
ARF的一级和预测三级结构与其他
最近克隆的G蛋白可能有助于识别特定的
参与结合其他蛋白质或结合和水解GTP的结构域。
在这种情况下,将使用定点诱变来构建特异性
改变蛋白质以测试ARF的细胞功能。
项目成果
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