MOLECULAR PHYSIOLOGY OF SUCCINIC ACID ACID BASED FERMENTATIONS IN ANAEROBES

厌氧菌中琥珀酸发酵的分子生理学

基本信息

  • 批准号:
    6258879
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.03万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    美国
  • 项目类别:
  • 财政年份:
    1997
  • 资助国家:
    美国
  • 起止时间:
    1997-06-01 至 1999-11-30
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

Succinic acid, the first large quantity commodity chemical, which can be made by fermentation of plant biomass substrates, is presently produced from petrochemical feedstocks. Succinic acid is an intermediate of the citric acid cycle, and many anaerobic bacteria form succinate as a fermentation product. The bacterium Anaerobiospirillum succiniciproducens is able to produce 35-50 g/l of succinate, but Actinobacillus sp. produces 130Z 65-80g/l. Phosphoenolpyruvate (PEP) carboxykinase is the key, regulated enzyme condensing PEP and CO2 to form oxaloacetate, in the pathway leading to succinate. We have successfully cloned and expressed A. succiniciproducens PEP carboxykinase in E. coli. This 60.9 kDa monomeric recombinant enzyme, containing an N-terminal His tag, was purified and used for the development of an MS-based protein sequencing method. At present we have purified the Actinobacillus sp 130Z PEP carboxykinase. TMPP-Ac charge derivatization and peptide sequencing by MALDI-PSD-MS is being used to assist in cloning the corresponding gene.
丁二酸是世界上第一大批量生产的化学品, 可以通过发酵植物生物质底物来制备,目前 由石化原料生产。 琥珀酸是一种 柠檬酸循环的中间体,以及许多厌氧细菌 形成琥珀酸作为发酵产物。 细菌 产琥珀酸厌氧生物菌能够产生35-50 g/l的琥珀酸, 琥珀酸,而放线杆菌产生130 Z 65- 80 g/l。 磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)羧激酶是关键的,调节酶 缩合PEP和CO2以形成草酰乙酸,在导致 琥珀酸盐。 我们成功地克隆并表达了A. succiniciproducens PEP羧激酶在E.杆菌 60.9 kDa 含有N-末端His标签的单体重组酶, 纯化并用于开发基于MS的蛋白质 测序法 目前,我们已经纯化了放线杆菌 130 Z PEP羧激酶。 TMPP-Ac电荷衍生化和肽 通过MALDI-PSD-MS进行的测序被用于辅助克隆 相应的基因。

项目成果

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