ELECTRON DIFFRACTION OF MEMBRANE PROTEINS
膜蛋白的电子衍射
基本信息
- 批准号:6280687
- 负责人:
- 金额:$ 0.05万
- 依托单位:
- 依托单位国家:美国
- 项目类别:
- 财政年份:1998
- 资助国家:美国
- 起止时间:1998-01-01 至 1998-12-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
(Supported in part by NSF MCB9506113 to C. Mannella) The purple
membrane study has been undertaken in order to ascertain whether the
HVEM can collect better ED data than the lower-voltage EMs. The
flatter Ewald sphere at 1200 kV gives a theoretical prediction that
the high-resolution amplitudes are more accurately collected at high
voltage, but this has not been demonstrated for membrane proteins,
where other factors, such as crystal disorder, limit the resolution.
The goals are to find the best instrument for ED of membrane proteins,
use direct methods to find the phases for the diffraction data, and
solve structures. The method will be tested with purple membrane and
applied to VDAC. We did several experiments to learn the best way to
prepare the purple membranes using both negative stain and glucose
embedding. We finally able to see membranes which were a few
micrometers on a side. Some of these gave six first-order spots by
laser optical diffractometry, and the spots were the right spacing for
the ~4 nm arrays expected for bacteriorhodopsin. Examination of the
same grid with the HVEM using MRF32 film (as sensitive as LoDose film,
but with a clear backgound) showed similar images, but we were unable
to get laser diffraction--possibly due to the film, but also possibly
due to distortion of the grid overnight. We repeated the procedure
and, once again, got membranes and 2 or 4 of the expected 6 spots
examining the fresh grid on the Zeiss, using SO163 film.
(部分由NSF MCB9506113至C.Mannella支持)紫色
已经进行了膜研究,以确定
与低电压EM相比,HVEM可以收集更好的ED数据。这个
在1200千伏时,更平坦的埃瓦尔德球给出了一个理论预测
高分辨率的振幅在高分辨率时更准确地采集
电压,但膜蛋白还没有证明这一点,
其中其他因素,如晶体无序,限制了分辨率。
我们的目标是找到膜蛋白电泳法的最佳仪器,
使用直接方法找出衍射数据的相位,以及
解决结构问题。该方法将用紫膜和
适用于VDAC。我们做了几个实验来学习最好的方法
负染法和葡萄糖法制备紫膜
嵌入。我们终于能够看到有几个膜
一边是微米。其中一些给出了六个一流的位置
激光光学衍射法,光斑的间距是正确的
细菌视紫红质所需的~4 nm阵列。考试的结果
与使用MRF32胶片的HVEM相同的网格(与LoDose胶片一样敏感,
但有清晰的背景)显示了类似的图像,但我们无法
以获得激光衍射--可能是由于薄膜,但也可能是
由于电网在一夜之间变形。我们重复了这个过程
然后,再一次,得到了薄膜和预期的6个斑点中的2到4个
使用SO163胶片检查蔡司的新栅格。
项目成果
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专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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