Monospecific monoclonal antibodies against human protein complexes on an interactome-wide scale.

项目摘要 抗体可以促进使用免疫组织化学方法研究细胞中不同蛋白质之间的关联。 免疫沉淀（IP）技术。 这种方法可以揭示蛋白质的差异 存在于健康与患病组织中的关联，提供了诊断的靶点， 治疗，并揭示蛋白质-蛋白质界面，可能是药物靶点。人们普遍 认识到缺乏针对人类蛋白质的高质量抗体会对人类的免疫系统产生负面影响， 生物医学科学 CDI Laboratories，Inc.， 开发了一条管道， 内容物全长人蛋白质阵列以产生可定量的单特异性小鼠 单克隆抗体（mAb），并已产生了大量的单克隆抗体对人类 转录因子（TF）。 该项目的PI已经开发出方法， 通过IP结合质量优化内源性蛋白质复合物的捕获 光谱分析 在这个STTR项目的第一阶段，Aim 1将表征抗人TF mAb对内源性癌症相关TF蛋白复合物的IP能力。 这将是 最初使用人组织培养细胞系完成，以建立定量功能性 mAbs的度量，然后应用于从患者来源的 癌的在目标2中，癌症相关的TF将用作天然复合物IP的诱饵，并且新的 通过用内源性TF蛋白复合物免疫产生mAb。 的 将使用人蛋白质组阵列确定mAb的靶特异性， 新的高质量mAb目录，用于研究蛋白质-β-蛋白质相互作用， 癌细胞该项目的长期目标将在第二阶段扩大和实现， 是生产大量高质量的抗天然人蛋白的mAb， 通常在健康和癌细胞中作为复合物的成分发现。

Project Summary    Antibodies can facilitate the study of associations between different proteins in the cell using a  technique  known  as  immunoprecipitation  (IP).  This  approach  can  reveal  differences  in  protein  associations  present  in  healthy  vs.  diseased  tissues,  provide  targets  for  diagnostics  and  therapeutics, and reveal protein--protein interfaces that could be druggable targets. It is widely  recognized that a lack of high quality antibodies against human proteins is negatively impacting  biomedical  science.  CDI  Laboratories,  Inc.,  has  developed  a  pipeline  that  employs  the  largest  content  full--length  human  protein  array  to  generate  quantifiably  monospecific  mouse  monoclonal  antibodies  (mAbs),  and  has  generated  a  large  number  of  mAbs  against  human  transcription  factors  (TFs).  The  PI  of  this  project  has  developed  methods  that  enable  and  optimize  the  capture  of  endogenous  protein  complexes  by  IP  in  conjunction  with  mass  spectrometry  analysis.  In  Phase  I  of  this  STTR  project,  Aim  1  will  characterize  anti--human  TF  mAbs  for  their  ability  to  IP  endogenous  cancer--related  TF  protein  complexes.  This  will  be  accomplished  initially  using  human  tissue  culture  cell  lines  to  establish  quantitative  functional  metrics  of  the  mAbs,  and  then  applied  to  protein  complexes  isolated  from  patient-­‐derived  cancers. In Aim 2, cancer--related TFs will be used as bait for IP of native complexes, and novel  mAbs  will  be  generated  by  immunization  with  the  endogenous  TF  protein  complexes.  The  target  specificity  of  the  mAbs  will  be  determined  using  the  human  proteome  array,  yielding  a  catalog  of  new,  high  quality  mAbs  with  which  to  study  protein-­‐protein  interactions  within  cancer cells. The long term goal of the project, which will be expanded and achieved in Phase II,  is the production of larger numbers of high quality mAbs against native human proteins that are  normally found as constituents of complexes in healthy and cancerous cells.