Recherche d'enzymes thermophiles d'intérêt industriel par une approche métagénomique

国际工业嗜热酶研究

• 批准号: 321851-2005
• 负责人: Juteau, Pierre
• 金额: $ 12.4万
• 依托单位: Institut national de la recherche scientifique
• 依托单位国家: 加拿大
• 项目类别: Strategic Projects - Group
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 加拿大
• 起止时间: 2005-01-01 至 2006-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://www.nserc-crsng.gc.ca/ase-oro/Details-Detailles_eng.asp?id=309411
• 关键词: Recherche; enzymes; thermophiles; int; industriel

Les enzymes sont utilisées dans diverses industries pour remplacer des produits chimiques agressifs nuisibles à l'environnement. Pour rester compétitives et améliorer leurs produits, les industries doivent trouver de nouvelles enzymes plus efficaces, plus résistantes et avec un spectre d'activité plus large. Comme ces enzymes proviennent généralement de micro-organismes, leur découverte passe traditionnellement par l'isolation en culture pure de micro-organismes producteurs à partir d'échantillons environnementaux. Cependant, puisque seul 1% des micro-organismes existants peuvent ainsi être obtenus en laboratoire en culture pure, 99% des enzymes présents dans la nature échappent à cette méthode. La métagénomique permet de contourner ce problème. Dans cette approche, tout l'ADN d'un échantillon environnemental est extrait et cloné dans une bactérie cultivable en laboratoire. On forme donc une « métagénothèque » contenant des milliers de clones dans lesquels est réparti le matériel génétique de la microflore de l'échantillon. Ensuite, ces clones sont criblés pour identifier ceux qui contiennent des gènes codant pour des enzymes d'intérêt industriel.       Le présent projet utilise donc la métagénomique pour trouver de nouvelles enzymes de type protéase, lipase et glycohydrolases démontrant, entre autres, une bonne thermostabilité. La microflore qui sert de source de gènes sera obtenue par un enrichissement en bioréacteurs aérobies thermophiles (55-70°C) recevant divers substrats d'intérêt (extrait de viande, huile, chitine, etc.). La métagénothèque sera formée par l'extraction de l'ADN d'un échantillon composite provenant des bioréacteurs et par le clonage de cet ADN dans un vecteur navette capable d'être utilisé par E. coli, Pseudomonas, Streptomyces et Bacillus. Deux stratégies de criblage robotisé seront utilisées, soit par hybridation sur puce d'ADN avec des sondes visant des gènes d'intérêt et par tests enzymatiques à l'aide de plaques de 96 puits et de substrats fluorogéniques. Les clones positifs seront caractérisés et séquencés, et les plus intéressants seront clonés dans des vecteurs d'expression. Les enzymes seront ensuite produites en fermenteur et testées en conditions industrielles.

酶可在多种行业中使用，以替代对环境有害的化学产品。为提高产品的竞争力和改善性，工业界提供了新的酶和功效，以及抗性和抗性，以及更大的活性。开始使用酶作为微生物的通用方法，通过传统的分离方法将微生物生产者的纯培养物置于环境中。 1% 的微生物存在于纯培养实验室中，99% 的酶存在于自然环境中。 La métagénomique permet decontourner ce 问题。在此过程中，我们从环境中提取出 ADN，并通过实验室可培养的细菌进行克隆。在形式上，“métagénothèque”内容是克隆工厂的内容，这些克隆是 lechantillon 微生物花的基因材料的一部分。套间中，克隆了一些用于识别工业酶基因的大陆的克隆。       目前的项目利用了蛋白酶、脂肪酶和糖水解酶等新型酶，具有良好的热稳定性。 La microflore qui sert de source de gènes sera obtenue par un enrichissement en bioréacteurs aérobies thermophiles (55-70°C) recevant divers substrats d'intérêt (extrait de viande, huile, chitine, etc). La métagénothèque sera formée 提取 ADN d'un échantillon 复合来源的生物反应器和 Cet ADN 克隆，并可用于大肠杆菌、假单胞菌、链霉菌和芽孢杆菌的载体。机器人抄写的双重策略是使用 ADN 杂交技术，并使用内部基因检测仪进行杂交，并测试 96 个点和荧光底物的噬菌斑酶。克隆的正面特征和序列，以及在表达式向量中的附加克隆。酶在工业条件下发酵和测试中提供了全套产品。