Evaluation du marché du TagR comme une nouvelle étiquette de fusion pour faciliter la surexpression, la solubilisation et la purification des protéines

点击翻译按钮获取中文摘要

La technologie de l'ADN recombinant a permis de cloner de très nombreuses protéines de différents organismes. Cependant, la production de protéines recombinantes fait souvent face à des problèmes importants de solubilité, de purification et de faibles rendements de surexpression. Ces contraintes sont généralement résolues en utilisant une étiquette de fusion qui permet à la fois d'augmenter le niveau de surexpression de la protéine d'intérêt ainsi que sa solubilité et sa pureté. On retrouve sur le marché de petites étiquettes (v.g. une queue de 6-10 histidines) ainsi que des étiquettes protéiques. Les petites étiquettes permettent généralement de purifier les protéines d'intérêt mais elles n'augmentent pas leur solubilité. La majorité des étiquettes protéiques permettent uniquement la purification des protéines d'intérêt. Seulement certaines de ces étiquettes permettent d'augmenter à la fois la surexpression, la solubilité et la pureté des protéines d'intérêt. Le "Gold Standard" des protéines d'intérêt est la GST (Glutatione-S-Transférase). Nous voulons poursuivre le développement de notre nouvelle étiquette protéique, appelée la TagR, dont les propriétés sont supérieures à celles de la GST. Les propriétés de ces deux étiquettes protéiques ont été comparées en utilisant jusqu'à maintenant deux protéines d'intérêt, la Lécithine : rétinol acyltransférase et la Rétinitis pigmentosa 2. Les avantages de la TagR en tant qu'étiquette de fusion sont les suivants : 1) c'est à la fois une étiquette de solubilité et de purification (similaire à la GST), 2) elle permet un rendement plus élevé de surexpression et une solubilité accrue des deux protéines d'intérêt comparativement à la GST, 3) une seule étape est nécessaire pour purifier les protéines d'intérêt (similaire à la GST), 4) cette technologie peut être offerte à un coût compétitif, 5) la présence de détergent ne cause pas de problème pour la purification des protéines d'intérêt, ce qui est impossible avec la GST.