Structural Biology of Miz-1 and of C2H2 Zinc Fingers

点击翻译按钮获取中文摘要

Cette programmation de recherche porte sur la biologie structurale de la liaison spécifique à l'ADN par Miz-1, un facteur de transcription contenant plusieurs doigts de Zinc (DZ) de type C2H2. Nous nous concentrerons sur l'interaction entre Miz-1 et les promoteurs proximaux des gènes p15INK4b (p15) et p21CIP1 (p21). Miz-1, lie directement ces promoteurs et active la transcription de p15 et p21. Plus de 700 gènes codent pour des facteurs de transcription à DZ C2H2 multiples (en moyenne 8 par gène). Les DZ de type C2H2 sont de petits domaines protéiques (~30 résidus) classiquement reconnu pour leur liaison spécifique à l'ADN. Cependant, un nouveau paradigme se dessine pour la biologie structurale et la fonction de ces facteurs de transcription. En effet, on propose que des sous-ensemble de DZ seraient spécialisés dans la liaison à l'ADN tandis que d'autres seraient plutôt aptes à lier d'autres protéines. Miz-1 contient 13 séquences consensus pour des DZ C2H2. En accord avec le paradigme émergent, les 4 premiers DZ de Miz-1 interagissent avec Smad3. Cette interaction est importante pour l'activation de la transcription de p15 et p21. D'un autre côté, nous ne savons pas quels sont les DZ qui interagissent avec l'ADN promotrice de p15 et p21. Dans ce contexte et en utilisant des approches expérimentales tels que la Résonance Magnétique Nucléaire, la Microscopie à Force Atomique, la Titration Calorimétrique Isotherme, les gels retards (EMSA) nous proposons: 1- De déterminer quels DZ sur Miz-1 interagissent avec l'ADN des régions promotrices de p15 et p21, 2- De résoudre la structure RMN des DZ 1 à 4 et 11 à 13 (nous avons déjà résolu les structures des DZ 5 à 10) et des complexes spécifiques avec l'ADN, 3- D'élucider le mode d'interaction the les DZ 1 à 4 de Miz-1 et Smad3 et 4- Investiguer l'effet de la liaison de Miz-1 sur la topologie des promoteurs proximaux de p15 et p21. Ainsi, nous contribuerons à l'essor d'un nouveau paradigme qui pourrait aider dans la compréhension de la fonction de près 700 gènes de notre génome et améliorer notre compréhension des mécanismes régulant l'expression de p15 et p21, deux gènes extrêmement important dans le cycle cellulaire.