静电纺丝纳米纤维生物膜合成茶氨酸的机理研究
批准号:
20976138
项目类别:
面上项目
资助金额:
34.0 万元
负责人:
李平
依托单位:
学科分类:
B0812.生物化工与合成生物工程
结题年份:
2012
批准年份:
2009
项目状态:
已结题
项目参与者:
朱融融、王兰芳、李昂、孙立明、刘博、苏雅娟、李莉
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中文摘要
茶氨酸具有重要的生理生化功能和药理保健功效。项目利用静电纺丝技术,以我们刚结题的一个面上基金项目为起点,对超量表达谷氨酰胺合成酶的大肠杆菌进行固定化,以期获得稳定性高、传质阻力小、负载量大、产物易分离等高催化效率的固定化纳米生物膜,通过运用先进的纳米纤维固定化技术提高茶氨酸酶法转化的催化效率。同时从茶树中茶氨酸合成酶的表达、纯化及晶体结构解析出发,通过与谷氨酰胺合成酶晶体结构的比对,根据酶的结构和功能的关系分析、酶分子的定点突变和酶与底物亲和力大小的等温滴定量热法的测定,对不同物种合成茶氨酸的酶学机理进行研究,有望解决目前茶氨酸合成过程中酶与底物的亲和力及产物转化率均较低的工业化现状。这将对揭示不同物种生物体内茶氨酸的合成具有重要理论意义,并为开发具有重要药理作用和保健活性的茶氨酸奠定前期研究基础。
英文摘要
茶氨酸具有重要的生理生化功能和药理保健功效。项目利用静电纺丝技术,对超量表达谷氨酰胺合成酶的菌株进行固定化,得到了纤维平均直径为220nm纳米活性膜,该膜具有稳定性高、传质阻力小、负载量大、产物易分离等特性。通过运用先进的纳米纤维固定化技术获得茶氨酸酶法转化效率为10.74g/L。同时从茶树中茶氨酸合成酶的表达、纯化及晶体结构解析出发,通过与谷氨酰胺合成酶晶体结构的比对,根据酶的结构和功能的关系分析、酶分子的定点突变和酶与底物亲和力大小的等温滴定量热法的测定,对不同物种合成茶氨酸的酶学性质及机理进行研究。获悉谷氨酰胺合成酶的绝大部分残基的主链构象角落在经验值内,每个单元中含有20个亚基,按照五元环的形式组成了一个由四个环组成的桶状结构;其单体是由N端的5个反向的β-sheet组成的β-grasp domain以及C端的catalytic domain组成。其中一个亚基的catalytic domain与相邻亚基的β-grasp domain相互作用,从而形成了一个五元环的结构,这样每一个五元环的结构中存在着5个活性位点。通过其它细节的比对发现在C端的His70-Ile74和Ar9292-Ser30 1上。His70一Ile74的变化可以解释为GS在不结合ADP会采取一种开放型的结构。Ar9292一Ser301为缺失电子云图的一段,意味着这一段在酶的结构上是非常不具有稳定性的一段。结合Eisenberg.D提出的GS的作用机理,推断Ar9292-Ser301的功能为控制反应底物进入活性位点。进而通过酶的结构修饰,提高其与底物的亲和力,获得茶氨酸的合成产量为18.10 g/L,实现谷氨酸的转化率为34.6%。克服目前茶氨酸合成过程中酶与底物的亲和力及产物转化率均较低的生产缺陷。这些对揭示不同物种生物体内茶氨酸的合成具有重要理论意义,并为开发具有重要药理作用和保健活性的茶氨酸奠定前期研究基础。
期刊论文列表
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
Immobilization of glucose oxidase in electrospun nanofibrous membranes for food preservation
电纺纳米纤维膜中葡萄糖氧化酶的固定化用于食品保鲜
DOI:10.1016/j.foodcont.2012.01.022
发表时间:2012-07-01
期刊:FOOD CONTROL
影响因子:6
作者:Ge, Ling;Zhao, Yu-sheng;Li, Ping
通讯作者:Li, Ping
Crystal structure of Saccharomyces cerevisiae glutamine synthetase Gln1 suggests a nanotube-like supramolecular assembly
酿酒酵母谷氨酰胺合成酶 Gln1 的晶体结构表明纳米管状超分子组装体
DOI:10.1002/prot.22403
发表时间:2009-07-01
期刊:PROTEINS-STRUCTURE FUNCTION AND BIOINFORMATICS
影响因子:2.9
作者:He, Yong-Xing;Gui, Long;Zhou, Cong-Zhao
通讯作者:Zhou, Cong-Zhao
DOI:10.1016/j.jhazmat.2010.02.054
发表时间:2010-07
期刊:Journal of hazardous materials
影响因子:13.6
作者:Ping Li;Yabin Su;Yan Wang;Bo Liu;Li-ming Sun
通讯作者:Ping Li;Yabin Su;Yan Wang;Bo Liu;Li-ming Sun
DOI:--
发表时间:--
期刊:中国食品学报
影响因子:--
作者:张群;张晨璐;李健;李平
通讯作者:李平
DOI:10.1021/jf200580t
发表时间:2011-03
期刊:Journal of agricultural and food chemistry
影响因子:6.1
作者:Li-ming Sun;Chen-lu Zhang;Ping Li
通讯作者:Li-ming Sun;Chen-lu Zhang;Ping Li
基于Cpx信号通路的EGCG抗菌机理及其水凝胶复合物的功效研究
- 批准号:21878236
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:66.0万元
- 批准年份:2018
- 负责人:李平
- 依托单位:
黎曼面上与稳定向量丛相关的若干几何拓扑性质的研究
- 批准号:11471247
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:60.0万元
- 批准年份:2014
- 负责人:李平
- 依托单位:
食源miRNA的存在、变化及其对靶基因的网络调控机制
- 批准号:21476176
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:86.0万元
- 批准年份:2014
- 负责人:李平
- 依托单位:
茶氨酸对映体的酶法拆分及对阿尔茨海默的调控
- 批准号:21276198
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:40.0万元
- 批准年份:2012
- 负责人:李平
- 依托单位:
指标理论和局部化公式在几何与拓扑中的一些应用
- 批准号:11101308
- 项目类别:青年科学基金项目
- 资助金额:20.0万元
- 批准年份:2011
- 负责人:李平
- 依托单位:
国内基金
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