中国野葡萄SBP转录活性、定位及其特异启动子功能研究

从中国野生葡萄华东葡萄克隆了18个SBP基因家族成员，其中12个含有与miRNA156/157互补的序列。系统发育树表明植物中的SBP基因可以分为7个亚族，其中葡萄SBP基因与双子叶被子植物的亲缘关系较近，而与单子叶被子植物的亲缘关系较远。对SBP基因在葡萄不同组织及果实发育不同阶段的时空表达模式分析表明，没有miR156/157靶位点的葡萄SBP基因表现为组成型表达。而具有miR156/157靶位点的葡萄SBP基因因为microRNA的抑制作用表现出不同的表达模式。基因表达芯片数据以及盐胁迫和外源激素处理后的实时定量RT-PCR分析表明部分葡萄SBP基因可能参与了对生物与非生物胁迫的防御；中国野葡萄VpSBP16基因完整开放阅读框序列全长1674 bp，编码558个氨基酸，定位核里且都具有转录激活活性。构建了pCAMBIA2300-35S-VpSBP16过量表达载体，过量表达VpSBP16明显提高了转基因植株对渗透胁迫，失水，干旱以及盐胁迫的耐受力；中国野葡萄VpSBP5基因完整开放阅读框序列全长3090 bp，编码1030个氨基酸。VpSBP5基因的表达在抗白粉病‘白河-35-1’比感病的‘湖南-1’中有更快的反应。VpSBP5可能通过SA、MeJA信号分子途径来调控葡萄对白粉病的抗性。克隆了VpSBP5基因启动子，构建了2个SBP上游调控序列与GUS报告基因融合载体，所克隆的2个SBP上游调控序列均具有病原菌诱导活性，中国野葡萄SBP5启动子活性高于欧洲葡萄SBP5基因启动子的活性；中国野葡萄VpSBP11基因完整开放阅读框序列全长510 bp，编码170个氨基酸。VpSBP11过量表达表明VpSBP11基因具有拟南芥早开花功能。构建VpSBP3, VpSBP11和VpSBP15基因重组原核表达载体pGEX-VpSBP，转化大肠杆菌Rosetta（DE3），以IPTG为诱导剂诱导目的融合蛋白的表达，重组原核表达载体pGEX-VpSBP在DE3中高效表达出了融合蛋白，免疫新西兰兔后得到了抗血清，经Western-Blot检测，免疫大白兔获得的血清特异性强，可用于SBP基因功能分析。邀请国内外专家6人次来校学术交流；参加国内外学术会议4次；发表学术论文13篇，其中SCI论文10篇；培养学术带头人1人；培养研究生9人，其中博士生3人；申请国家发明专利1项。