HPV16 E7结合亲和体分子及其affitoxin对宫颈癌的靶向治疗研究

人乳头瘤病毒(HPV)L1蛋白疫苗已成功上市用于预防宫颈癌，但对已经感染HPV及其所致的宫颈癌和癌前病变，尚无特异性治疗方法，因此宫颈癌仍然威胁着全球妇女的身体健康。基于单克隆抗体及其片段的肿瘤分子靶向治疗已取得了重大的研究进展，但仍然存在毒副作用大、价格昂贵和稳定性差等问题急待解决。研究发现，来源于葡萄球菌蛋白A的亲和体(affibdoy)分子，具有以高亲和力与特定蛋白分子结合特性而类似抗体，同时穿透性好、易于制备和稳定性强等特性在应用方面比抗体更具可行性和优势。本研究拟通过分子生物学和噬菌体展示技术，筛选HPV16 E7特异性亲和体分子，并制备HPV16 E7特异性亲和体携带细菌毒素的重组蛋白（HPV16 E7 affitoxin）,进一步通过细胞水平和动物水平验证其对宫颈癌细胞的分子靶向结合和治疗作用。为发展基于HPV16E7亲和体的宫颈癌特异性靶向治疗提供新途径，极具应用前景。

宫颈癌在全球女性人群中发病率和死亡率仍然居高不下，迄今尚无特异性治疗方法。基于单克隆抗体的分子靶向治疗为肿瘤的生物免疫治疗开创了崭新的途径，但仍有一些问题尚待解决，如毒副作用大和价格昂贵等。本研究针对上述问题开展研究，以葡萄球菌蛋白A亲和体(affibdoy)分子为基础，通过分子生物学和噬菌体展示技术，筛选了HPV16 E7结合亲和体分子（ZHPV16 E7 affibody），并制备HPV16 E7特异性亲和体携带细菌毒素的重组蛋白（ZHPV16 E7 affitoxin）,进一步通过蛋白水平、细胞水平和荷瘤裸鼠（动物水平）对筛选的affibody及其affitoxin分子的分子靶向结合和肿瘤生长抑制作用进行了验证。（1）构建了ZHPV16 E7 affibody的随机组合噬菌体展示文库。（2）获得了ZHPV16 E7 affibody分子65个，选择了其中的4个（ZHPV16 E7:127，ZHPV16 E7:301，ZHPV16 E7:384，ZHPV16 E7:745）进行了原核表达，并制备了纯化蛋白。（3）利用SPR技术验证了筛选的ZHPV16 E7 affibody分子与HPV16 E7蛋白具有极高的亲和力。（4）利用免疫荧光共定位技术验证了筛选的ZHPV16 E7 affibody分子特异靶向宫颈癌细胞表达的HPV16 E7蛋白。（5）利用小动物成像技术验证了ZHPV16 E7 affibody分子具有快速靶向HPV16阳性肿瘤的特性。（6）利用原核表达系统制备并纯化了ZHPV16E7 affitoxin，验证了affitoxin 在蛋白水平、细胞水平及动物在体水平对HPV16 E7蛋白的靶向特异性。（7）对affibody及affitoxin的生物学特性进行了研究：半衰期、LD50和IC50等。（8）ZHPV16 E7 affitoxin 蛋白对宫颈癌荷瘤裸鼠的治疗作用：①成功建立了裸鼠宫颈癌细胞荷瘤模型；②验证了其对致瘤作用具有显著的抑制作用；③验证了其显著的靶向抑瘤作用，且毒副作用不明显。本研究为发展基于ZHPV16 E7 affibody的宫颈癌特异性靶向治疗提供新途径，极具应用前景。研究成果多次参加国内外学术会议交流。获成果2项，申报发明专利1项；发表论著8篇（SCI论文2篇）,2篇论文分别正在评审和总结中；培养博士生1人，硕士研究生8人。

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