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EB病毒LMP2特异性结合affibody分子的筛选及特性研究
结题报告
批准号:
81372447
项目类别:
面上项目
资助金额:
75.0 万元
负责人:
张丽芳
依托单位:
学科分类:
H1815.肿瘤靶向治疗
结题年份:
2017
批准年份:
2013
项目状态:
已结题
项目参与者:
朱珊丽、陈韶、董海艳、陈向敏、钟晓芝、王乐丹、涂建欣、王冰冰、林晓云
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中文摘要
EB病毒(EBV)感染十分广泛,并与鼻咽癌及淋巴瘤等恶性肿瘤发病密切相关。目前,尚无特异方法防治EBV所致的感染及其相关肿瘤,基于单克隆抗体的分子靶向治疗是当前肿瘤治疗研究中最具前景的新手段,但毒副作用大,稳定性差及体内清除过快等问题限制了其广泛应用。亲和体(affibdoy)分子来源于葡萄球菌蛋白A(SPA),具备以高亲和力与特定蛋白分子结合的特性,同时因穿透性强、稳定性好和易于制备等诸多优点,在肿瘤治疗方面比单克隆抗体更具优势。本研究拟通过基因工程手段和噬菌体展示技术,筛选EBV潜伏膜蛋白2(LMP2)特异性affibdoy分子,并制备特异性affibdoy分子携带细菌毒素的重组蛋白(affitoxin),进一步通过体内外实验验证EBV LMP2的affitoxin对鼻咽癌的分子靶向结合和治疗作用。为发展基于LMP2亲和体的EBV感染相关肿瘤的特异性靶向治疗提供新途径,应用前景广阔。
英文摘要
Epstein-Barr virus (EBV) infection is very wide and is closely related to the pathogenesis of tumors such as nasopharyngeal carcinoma and lymphoma. Till to now, there is no specific approach to combating EBV infection and its related tumors.Molecular targeted therapies based on monoclonal antibody is the most promising new way for tumor therapy. However, the problems such as its side effects, poor stability and in vivo clearance quickly limited its wider application. Affibody molecules derived from staphylococcal protein A (SPA), has the characteristics of high affinity bingding with specific protein molecules, and also has strong penetrating, good stability and easy to prepare. Therfore, there are more advantages than monoclonal antibodies in cancer targeting therapy. In this study, we intend to screen the EBV LMP2 specific affibody molecules by using genetic engineering and phage display technology, and prepare the specific affibody molecules recombinant protein with bacterial toxins (affitoxin), to test and verify its specific binding and targeting to nasopharyngeal cancer cells in vitro and in vivo. The study may provide a new way for the specific targeting therapy to tumors assiociated with EBV infection, and have a great application prospects.
EB病毒(EBV)感染感染与鼻咽癌及淋巴瘤等肿瘤发病密切相关,目前尚无特异防治方法。基于单克隆抗体的分子靶向肿瘤治疗是最新治疗手段,但毒副作用大和免疫原性等问题急待解决。本研究针对上述问题开展研究,以葡萄球菌蛋白A亲和体(affibdoy)分子为基础,通过噬菌体展示技术获得了EBV LMP2结合亲和体分子(ZEBV LMP2),并制备LMP2特异性亲和体携带细菌毒素的重组蛋白(Z EBV LMP2 affitoxin),进一步对筛选的亲和体及其affitoxin分子的分子靶向结合和抑制肿瘤生长作用进行了验证。(1)构建了Z EBV LMP2的随机组合噬菌体展示文库。(2)获得了Z EBV LMP2分子56个,选择了其中的4个(Z EBV LMP2:12,Z EBV LMP2:132,Z EBV LMP2:137,Z EBV LMP2:142)进行了原核表达并制备了纯化蛋白。(3)利用SPR技术验证了Z EBV LMP2分子与EBV LMP2蛋白具有极高的亲和力。(4)利用免疫荧光技术验证了Z EBV LMP2分子特异靶向鼻咽癌细胞表达的EBV LMP2蛋白。(5)利用小动物成像技术验证了Z EBV LMP2分子具有快速靶向EBV LMP2阳性肿瘤的特性。(6)利用原核表达系统制备并纯化了Z EBV LMP2 affitoxin,验证了affitoxin 在对EBV LMP2蛋白的靶向特异性。(7)对亲和体及affitoxin的生物学特性进行了研究:半衰期、LD50和IC50等。(8)Z EBV LMP2affitoxin 蛋白对鼻咽癌荷瘤裸鼠的治疗作用:①建立了鼻咽癌细胞荷瘤裸鼠模型;②验证了其对致瘤作用的显著保护作用;③验证了其显著的靶向抑瘤作用,且毒副作用不明显。本研究为发展基于ZEBV LMP2的鼻咽癌特异性靶向治疗提供新途径,极具应用前景。研究成果多次参加学术会议交流。申报发明专利2项;发表论著7 篇(SCI论文1篇);培养硕士研究生4人。
期刊论文列表
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
DOI:10.13350/j.cjpb.161002
发表时间:2016
期刊:中国病原生物学杂志
影响因子:--
作者:张婵琼;宋易玲;岑丹维;蔡一奇;叶晓鲜;毛珊珊;蒋朋飞;李文姝;张丽芳
通讯作者:张丽芳
DOI:--
发表时间:2017
期刊:温州医科大学学报
影响因子:--
作者:蔡一奇;程开;陈旭东;陈孝冬;岑丹维;张婵琼;宋易玲;毛姗姗;叶晓鲜;张丽芳;朱冠保
通讯作者:朱冠保
Chimerically fused antigen rich of overlapped epitopes from latent membrane protein 2 (LMP2) of Epstein-Barr virus as a potential vaccine and diagnostic agent
富含 Epstein-Barr 病毒潜伏膜蛋白 2 (LMP2) 重叠表位的嵌合融合抗原,作为潜在的疫苗和诊断剂
DOI:10.1038/cmi.2015.29
发表时间:2016-07-01
期刊:CELLULAR & MOLECULAR IMMUNOLOGY
影响因子:24.1
作者:Lin,Xiaoyun;Chen,Shao;Zhang,Lifang
通讯作者:Zhang,Lifang
DOI:10.13200/j.cnki.cjb.001675
发表时间:2017
期刊:中国生物制品学杂志
影响因子:--
作者:汪文寰;冯方方;蔡一奇;张婵琼;岑丹维;宋易玲;郭刚强;张丽芳;李文姝
通讯作者:李文姝
DOI:--
发表时间:2017
期刊:温州医科大学学报
影响因子:--
作者:岑丹维;宋易玲;张婵琼;毛珊珊;叶晓鲜;陈俊;陈韶;朱珊丽;张丽芳
通讯作者:张丽芳
双靶点affibody分子及其对鼻咽癌细胞靶向作用机制研究
  • 批准号:
    81972550
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    55.0万元
  • 批准年份:
    2019
  • 负责人:
    张丽芳
  • 依托单位:
HPV16 E7结合亲和体分子及其affitoxin对宫颈癌的靶向治疗研究
  • 批准号:
    81172463
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    57.0万元
  • 批准年份:
    2011
  • 负责人:
    张丽芳
  • 依托单位:
沙眼衣原体主要外膜蛋白表位疫苗及其免疫效应研究
  • 批准号:
    30972669
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    33.0万元
  • 批准年份:
    2009
  • 负责人:
    张丽芳
  • 依托单位:
人乳头瘤病毒与EBV-LMP2多表位嵌合疫苗的免疫效应研究
  • 批准号:
    30671882
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    24.0万元
  • 批准年份:
    2006
  • 负责人:
    张丽芳
  • 依托单位:
人乳头瘤病毒-沙眼衣原体嵌合病毒样颗粒疫苗的研究
  • 批准号:
    30271191
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    20.0万元
  • 批准年份:
    2002
  • 负责人:
    张丽芳
  • 依托单位:
国内基金
海外基金