沙眼衣原体主要外膜蛋白表位疫苗及其免疫效应研究

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
30972669
项目类别：
面上项目
资助金额：
33.0万
负责人：
张丽芳
依托单位：
温州医科大学
学科分类：
H2208.性传播疾病
结题年份：
2012
批准年份：
2009
项目状态：
已结题
起止时间：
2010-01-01 至2012-12-31

项目参与者：
赵孔南；朱珊丽；李文姝；陈向敏；卓佳；陈俊；陆丽君；巩文词；王佳；
关键词：
沙眼衣原体疫苗表位

项目摘要

沙眼衣原体（Ct）型别众多，感染十分普遍，易致不育、不孕及致盲等严重并发症，且极易复发，治疗费用昂贵，迫切需要发展可针对多型Ct感染的有效疫苗进行防治。本研究拟对多个血清型别的Ct外膜蛋白（MOMP）进行细胞毒T细胞（CTL）表位和B细胞表位的预测和鉴定，选择共同的表位基因；同时选择具有安全有效、可形成病毒样颗粒（VLPs）的乙肝病毒表面抗原（HBsAg）为载体，将筛选的表位基因替代或插入HBsAg氨基酸的特定序列，制备HBsAg/Ct-MOMP多表位嵌合VLPs，并探讨其刺激机体产生的免疫效应。目的是使Ct多表位嵌合VLPs，能刺激机体免疫系统同时产生Ct特异性的中和反应和CTL反应，从而同时具有预防和治疗多种血清型别Ct感染的双重效应。进一步通过小鼠模型探讨其对Ct感染的免疫保护效应，筛选有效的表位嵌合VLPs作为候选疫苗，为发展Ct多表位疫苗奠定基础。

结项摘要

沙眼衣原体（Ct）是全球最常见的性传播疾病病原，易致不育、不孕及致盲等严重并发症，抗生素治疗后极易复发，治疗费用昂贵，迫切需要发展有效的防治疫苗，而Ct的靶抗原筛选及其释放系统是疫苗研究中面临的难题。本研究针对上述问题开展工作，对多个血清型别的Ct外膜蛋白（MOMP）进行T和B细胞表位的预测和鉴定，选择含有多个表位的免疫优势表位 (多表位) 基因；同时选择可形成病毒样颗粒（VLPs）的乙肝病毒表面抗原（HBsAg）和核心抗原（HBcAg）为携带表位的载体。通过分子克隆、电镜观察、间接免疫荧光、Westernblot、ELISA、CTL杀伤、T细胞增殖、小鼠生殖道Ct感染模型建立及其分泌物Ct分离培养和计数等实验方法，对MOMP多表位疫苗（MOMPm）的免疫原性和免疫保护作用进行了验证。(1)建立了小鼠生殖道人E血清型Ct感染模型；(2)建立了RT-PCR定量和免疫荧光检测Ct的方法。(3)构建了pcDNA3.1(+)/ HbsAg-Ct MOMPm重组质粒，证实了在真核细胞中的表达；并通过小鼠模型证实了Ct MOMPm重组质粒具有较强的免疫原性和对小鼠生殖道Ct感染的免疫保护作用。(4) 对HbcAg载体携带异源表位基因的位置进行了设计，即在其N、C和MIR区携带MOMPm序列，为增强免疫原性，在MOMPm序列的N端引进了通用Th表位 (PADRE)，并进行HBcAg/Ct-MOMPm原核表达蛋白的鉴定和纯化，证实了Th表位能增强MOMPm的免疫原性，HbcAg载体的N端携带表位能产生更强的免疫原性和免疫保护作用；(5) 对MOMPm序列进行了串联表位的设计，将其克隆至HbcAg载体的MIR区，并进行HBcAg/Ct-MOMP串联表位原核表达蛋白的鉴定和纯化，证实了三个多表位串联免疫保护作用最强，与Ct全菌体免疫保护作用基本一致，可以作为疫苗开发的候选疫苗。本研究为以HbsAg和HbcAg VLPs为载体的MOMPm疫苗防治Ct感染的研究提供了理论依据和实验基础。研究成果多次参加国内外学术会议交流，获发明专利1项，总结发表论文16篇，国际会议交流11篇，7篇论文正在总结中，3项专利正在总结申请中；参加国内外学术交流10人次；培养硕士研究生21人。