沙眼衣原体主要外膜蛋白表位疫苗及其免疫效应研究
批准号:
30972669
项目类别:
面上项目
资助金额:
33.0 万元
负责人:
张丽芳
依托单位:
学科分类:
H2208.性传播疾病
结题年份:
2012
批准年份:
2009
项目状态:
已结题
项目参与者:
赵孔南、朱珊丽、李文姝、陈向敏、卓佳、陈俊、陆丽君、巩文词、王佳
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中文摘要
沙眼衣原体(Ct)型别众多,感染十分普遍,易致不育、不孕及致盲等严重并发症,且极易复发,治疗费用昂贵,迫切需要发展可针对多型Ct感染的有效疫苗进行防治。本研究拟对多个血清型别的Ct外膜蛋白(MOMP)进行细胞毒T细胞(CTL)表位和B细胞表位的预测和鉴定,选择共同的表位基因;同时选择具有安全有效、可形成病毒样颗粒(VLPs)的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)为载体,将筛选的表位基因替代或插入HBsAg氨基酸的特定序列,制备HBsAg/Ct-MOMP多表位嵌合VLPs,并探讨其刺激机体产生的免疫效应。目的是使Ct多表位嵌合VLPs,能刺激机体免疫系统同时产生Ct特异性的中和反应和CTL反应,从而同时具有预防和治疗多种血清型别Ct感染的双重效应。进一步通过小鼠模型探讨其对Ct感染的免疫保护效应,筛选有效的表位嵌合VLPs作为候选疫苗,为发展Ct多表位疫苗奠定基础。
英文摘要
沙眼衣原体(Ct)是全球最常见的性传播疾病病原,易致不育、不孕及致盲等严重并发症,抗生素治疗后极易复发,治疗费用昂贵,迫切需要发展有效的防治疫苗,而Ct的靶抗原筛选及其释放系统是疫苗研究中面临的难题。本研究针对上述问题开展工作,对多个血清型别的Ct外膜蛋白(MOMP)进行T和B细胞表位的预测和鉴定,选择含有多个表位的免疫优势表位 (多表位) 基因;同时选择可形成病毒样颗粒(VLPs)的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和核心抗原(HBcAg)为携带表位的载体。通过分子克隆、电镜观察、间接免疫荧光、Westernblot、ELISA、CTL杀伤、T细胞增殖、小鼠生殖道Ct感染模型建立及其分泌物Ct分离培养和计数等实验方法,对MOMP多表位疫苗(MOMPm)的免疫原性和免疫保护作用进行了验证。(1)建立了小鼠生殖道人E血清型Ct感染模型;(2)建立了RT-PCR定量和免疫荧光检测Ct的方法。(3)构建了pcDNA3.1(+)/ HbsAg-Ct MOMPm重组质粒,证实了在真核细胞中的表达;并通过小鼠模型证实了Ct MOMPm重组质粒具有较强的免疫原性和对小鼠生殖道Ct感染的免疫保护作用。(4) 对HbcAg载体携带异源表位基因的位置进行了设计,即在其N、C和MIR区携带MOMPm序列,为增强免疫原性,在MOMPm序列的N端引进了通用Th表位 (PADRE),并进行HBcAg/Ct-MOMPm原核表达蛋白的鉴定和纯化,证实了Th表位能增强MOMPm的免疫原性,HbcAg载体的N端携带表位能产生更强的免疫原性和免疫保护作用;(5) 对MOMPm序列进行了串联表位的设计,将其克隆至HbcAg载体的MIR区,并进行HBcAg/Ct-MOMP串联表位原核表达蛋白的鉴定和纯化,证实了三个多表位串联免疫保护作用最强,与Ct全菌体免疫保护作用基本一致,可以作为疫苗开发的候选疫苗。本研究为以HbsAg和HbcAg VLPs为载体的MOMPm疫苗防治Ct感染的研究提供了理论依据和实验基础。研究成果多次参加国内外学术会议交流,获发明专利1项,总结发表论文16篇,国际会议交流11篇,7篇论文正在总结中,3项专利正在总结申请中;参加国内外学术交流10人次;培养硕士研究生21人。
期刊论文列表
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
DOI:--
发表时间:--
期刊:温州医学院学报
影响因子:--
作者:陈昊;巩文词;陈江;冯娟;吕艳;朱珊丽;陈向敏;薛向阳;张丽芳
通讯作者:张丽芳
DOI:--
发表时间:--
期刊:中国人兽共患病学报
影响因子:--
作者:王乐丹;颜林志;孟锐锋;张丽芳
通讯作者:张丽芳
DOI:--
发表时间:--
期刊:中华传染病学杂志
影响因子:--
作者:李文姝;郑美霞;欧琴;朱珊丽;张丽芳
通讯作者:张丽芳
DOI:--
发表时间:--
期刊:中国病原生物学杂志
影响因子:--
作者:李玲玲;周珠哈;朱珊丽;薛向阳;张丽芳
通讯作者:张丽芳
DOI:--
发表时间:--
期刊:中国病原生物学杂志
影响因子:--
作者:巩文词;朱珊丽;赵朋云;王佳;陈俊;陈韶;李文姝;张丽芳
通讯作者:张丽芳
双靶点affibody分子及其对鼻咽癌细胞靶向作用机制研究
- 批准号:81972550
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:55.0万元
- 批准年份:2019
- 负责人:张丽芳
- 依托单位:
EB病毒LMP2特异性结合affibody分子的筛选及特性研究
- 批准号:81372447
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:75.0万元
- 批准年份:2013
- 负责人:张丽芳
- 依托单位:
HPV16 E7结合亲和体分子及其affitoxin对宫颈癌的靶向治疗研究
- 批准号:81172463
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:57.0万元
- 批准年份:2011
- 负责人:张丽芳
- 依托单位:
人乳头瘤病毒与EBV-LMP2多表位嵌合疫苗的免疫效应研究
- 批准号:30671882
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:24.0万元
- 批准年份:2006
- 负责人:张丽芳
- 依托单位:
人乳头瘤病毒-沙眼衣原体嵌合病毒样颗粒疫苗的研究
- 批准号:30271191
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:20.0万元
- 批准年份:2002
- 负责人:张丽芳
- 依托单位:
国内基金
海外基金















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