RSV编码的NSvc2蛋白在灰飞虱传毒中的功能研究
结题报告
批准号:
31170142
项目类别:
面上项目
资助金额:
60.0 万元
负责人:
周益军
依托单位:
学科分类:
C0107.病毒学
结题年份:
2015
批准年份:
2011
项目状态:
已结题
项目参与者:
熊如意、徐秋芳、李硕、孙丽娟、张金凤、王莹
国基评审专家1V1指导 中标率高出同行96.8%
结合最新热点,提供专业选题建议
深度指导申报书撰写,确保创新可行
指导项目中标800+,快速提高中标率
客服二维码
微信扫码咨询
中文摘要
近年来由灰飞虱传播RSV引起的水稻条纹叶枯病在我国广大稻区爆发流行,对水稻生产构成极大威胁。然而对灰飞虱传播RSV的机制还知之甚少。申请人通过生物信息学分析发现RSV NSvc2蛋白与番茄斑萎病毒(TSWV)膜糖蛋白GN/GC存在诸多相似点,NSvc2可预测切割成两个蛋白,而TSWV GN/GC的缺失能导致蓟马传毒能力的丧失,NSvc2是否与灰飞虱传播病毒相关还有待深入研究。本项目拟通过western bolt等方法,明确NSvc2是否确实编码两个蛋白,并通过蛋白饲喂、灰飞虱传毒接种等方法,明确NSvc2前体及切割蛋白对灰飞虱传毒的影响;同时构建预测切割位点突变的NSvc2突变体,分析切割位点突变对灰飞虱传毒的影响,明确NSvc2是否必须通过切割产生两个蛋白后对传毒起作用;通过糖基化检测明确NSvc2蛋白是否为糖蛋白,分析去糖基化对灰飞虱传毒的影响。结果有望在RSV传毒因子方面有新的突破。
英文摘要
水稻条纹叶枯病是由灰飞虱传播水稻条纹病毒(RSV)引起的,研究灰飞虱传毒机制是防治该病害的关键。RSV的NSvc2蛋白与TSWV的膜糖蛋白(参与蓟马传播的决定因子)在基因组结构方面相对应,因此,推测NSvc2蛋白为RSV参与灰飞虱传播的决定因子。为此,本项目围绕RSV膜糖蛋白NSvc2展开了研究。.对NSvc2蛋白进行结构预测,绘制NSvc2蛋白拓扑结构示意图,预测NSvc2为糖蛋白,在寄主体内存在切割现象,被切割成2个蛋白R-GN/R-GC行使功能。经Western-blot分析验证,NSvc2在水稻中被切割成2个蛋白,与预测结果基本一致;在灰飞虱体内,NSvc2为完整的94 kDa蛋白,无切割现象。这是首次发现RSV NSvc2蛋白在水稻和灰飞虱体内以2种不同的形式存在,与RSV其它基因产物不同。.激光共聚焦观察R-GN、R-GC蛋白在植物中的亚细胞定位,结果显示R-GN定位于叶片细胞的高尔基体,R-GC定位于细胞的内质网上,同时R-GN具有将R-GC招募到高尔基体上的功能,这也间接证明了R-GN与R-GC之间的互作关系。.以R-GN为诱饵,筛选灰飞虱酵母双杂交cDNA文库,获得了3个互作膜蛋白。选取一个重要的蛋白,完成了基因克隆。经NCBI比对没有发现其同源基因,确定其为一个灰飞虱的特有蛋白,命名为GN-Rp。蛋白互作分析证实了GN-Rp与R-GN的互作,并发现GN-Rp与RSV-CP没有互作关系。GN-Rp的表达量与灰飞虱的获毒和传毒能力在时间方面是呈正相关的。.以RNAi干扰昆虫体内R-GN的表达,发现R-GN表达受到抑制后,与对照相比,带毒灰飞虱将RSV传给水稻植株的能力无显著变化。由于传毒屏障在介体唾液腺,因此,R-GN很可能没有参与RSV与介体唾液腺的互作,而是参与了RSV与介体中肠屏障的互作。.对带毒灰飞虱体内的RSV内含体进行了电镜观察,发现灰飞虱卵巢滤泡细胞内有大量的不定形RSV内含体,其形态结构与水稻组织中的RSV内含体基本一致,暗示RSV在灰飞虱卵巢滤泡细胞内复制和积累强烈,这是首次报道灰飞虱体内的RSV内含体。.本项目为进一步分析NSvc2在灰飞虱传播RSV过程中的功能奠定了基础。发表论文11篇,培养硕士生3名,达到了预期目标。
期刊论文列表
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
DOI:10.3390/v7031492
发表时间:2015-03-23
期刊:Viruses
影响因子:--
作者:Li S;Ge S;Wang X;Sun L;Liu Z;Zhou Y
通讯作者:Zhou Y
DOI:--
发表时间:2014
期刊:江苏农业学报
影响因子:--
作者:徐秋芳;张金凤;李硕;周益军
通讯作者:周益军
DOI:--
发表时间:2012
期刊:江苏农业学报
影响因子:--
作者:李硕;程兆榜;周彤;范永坚
通讯作者:范永坚
Rice stripe virus affects the viability of its vector offspring by changing developmental gene expression in embryos.
水稻条纹病毒通过改变胚胎中的发育基因表达来影响其载体后代的生存能力
DOI:10.1038/srep07883
发表时间:2015-01-20
期刊:Scientific reports
影响因子:4.6
作者:Li S;Wang S;Wang X;Li X;Zi J;Ge S;Cheng Z;Zhou T;Ji Y;Deng J;Wong SM;Zhou Y
通讯作者:Zhou Y
Rice Stripe Tenuivirus NSvc2 Glycoproteins Targeted to the Golgi Body by the N-Terminal Transmembrane Domain and Adjacent Cytosolic 24 Amino Acids via the COP I- and COP II-Dependent Secretion Pathway
水稻条纹细病毒 NSvc2 糖蛋白通过 COP I 和 COP II 依赖性分泌途径,通过 N 端跨膜结构域和相邻胞质 24 个氨基酸靶向高尔基体
DOI:10.1128/jvi.03006-13
发表时间:2014-03-01
期刊:JOURNAL OF VIROLOGY
影响因子:5.4
作者:Yao, Min;Liu, Xiaofan;Tao, Xiaorong
通讯作者:Tao, Xiaorong
TYLCV编码的C4与寄主番茄slAnnD2互作在病毒运动中的作用机理研究
  • 批准号:
    31770168
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    65.0万元
  • 批准年份:
    2017
  • 负责人:
    周益军
  • 依托单位:
灰飞虱与水稻条纹病毒互作过程中pc2受体蛋白GN-Rp的功能研究
  • 批准号:
    31470256
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    85.0万元
  • 批准年份:
    2014
  • 负责人:
    周益军
  • 依托单位:
国内基金
海外基金