14-3-3 通过与不同蛋白质相互作用而参与包括信号转导、转录调控、物质转运、离子通道调节、细胞凋亡、周期调控以及细胞恶性表型在内的各种生物学过程。前期，我们采用免疫共沉淀级联质谱策略发现14-3-3ξ 是HNF1α 的另外一个新相互作用候选分子。在本项目中，我们利用免疫共沉淀实验证明14-3-3ξ与 HNF1α存在蛋白质相互作用；GST-pull down 实验进一步证明14-3-3ξ 与HNF1α 存在相互作用；荧光素酶报道基因实验证明14-3-3ξ 增强HNF1α 依赖的转录活性；染色体免疫共沉淀实验和EMSA 实验证明14-3-3ξ被HNF1α 募集到其靶基因的启动子区并增强其DNA 结合能力；RNAi 下调内源性的14-3-3ξ，HNF1α 的部分下游靶基因的mRNA 表达下降，而部分靶基因的mRNA 表达没有改变，提示14-3-3ξ 可能是HNF1α的重要调控分子，并在HNF1α 靶基因的选择性表达中发挥重要的调控作用。生物信息学分析显示，HNF1α 的S247 和S303 是潜在的14-3-3 识别位点，我们通过质谱鉴定证明HNF1αS247的磷酸化，点突变实验表明S247的磷酸化修饰对HNF1α的转录活性至关重要。此外，我们还证实HNF1α与14-3-3的相互作用依赖S247的磷酸化。综上所述，14-3-3/HNF1α 的相互作用可能具有重要的生理意义，并可能在肝脏、胰腺等疾病的发生、发展中起作用。