小分子RNA干扰提高假单胞菌吩嗪1-羧酸合成水平

微生物代谢调控很复杂，用传统技术包括基因突变、敲除或体外活性测定进行研究工作量大、效率低，急需更新的策略来加快这类研究。古生菌P. furiosus CRISPR-cas复合物如同真核的RNA干扰沉默复合物RISC，能够利用sRNA指导目标RNA降解。本项目提出用染色体同源重组改造技术，将P. furiosus CRISPR-cas复合物的编码基因插入假单胞菌PAO1染色体，在假单胞菌表达并证实这种复合物在假单胞菌细胞内也具有sRNA指导的裂解目标RNA的活性，建立细菌sRNA干扰技术。然后用sRNA干扰阻遏PCA合成负调节因子的表达，测定假单胞菌PAO1吩嗪1-羧酸（PCA）的产量，揭示PCA合成途径的调节机制。根据上述研究的结果，遗传改造PCA合成调控，构建PCA高产菌株。显然，这项研究的成功将极大地促进受多重因素调节的代谢途径研究。