强直性脊柱炎致病风险基因HLA-B2715的作用机制研究

强直性脊柱炎(AS)是青壮年常见病，致残率和家族遗传倾向高，至今无特效治疗办法。HLA-B27基因与该病关联已有37年研究基础，但该基因多态性高度复杂，捕获其致病相关的风险分子基础和致病机制仍是当今AS研究难题。我们最近研究：1. 首次完成了我国1000例AS全基因组SNPs关联分析并获得了我国AS患者和健康人MHC 区基因型数据资料；2. 发现一个在健康人至今没有报道仅在AS病人携带的HLA-B2715亚型的3代共6个AS病人的家系和6例散发AS病人。本研究拟把AS病人的HLA-B*2715基因的cDNA序列构建HLA-B*2715基因真核细胞慢病毒表达载体并转染到U937细胞，进一步探讨在LPS刺激后用TNF-α抗体再抑制，HLA-B*2715基因调控TNF-α和Wnt等炎症和骨代谢相关的分子基础和作用，为B27介导的AS相关致病机制提供新的理论依据。

强直性脊柱炎致病风险基因HLA-B2715的作用机制研究 . 本课题主要进行了如下两方面的研究:.一. 我国AS患者HLA-B27亚型与临床表型的研究.随访了846例符合1984年纽约标准的无亲缘关系的AS患者和纳入959例健康志愿者。采集患者年龄，起病年龄，家族史，外周关节受累情况，髋关节受累情况以及关节外器官受累情况。采血标本提取基因组DNA。.结果显示, AS患者中，HLA-B*2704为主要的HLA-B27亚型类型，其次是HLA-B*2705。所有个体中HLA-B*2715阳性者有10例，所有HLA-B*2715阳性的都是AS患者，发病年龄较低；HLA-B*2705阳性的AS患者起病年龄较HLA-B*2704阳性的患者大，但是腊肠指和虹膜炎更多见。 虹膜炎与HLA-B*2705关系更加密切。其他指标如家族史，下背痛和外周关节炎与髋关节炎在不同亚型之间无明显差异。并与建立和HLA-B2715的分子模拟图..结论：中国人群AS患者中HLA-B*2704是主要的HLA-B27亚型，不同亚型的HLA-B27可能与不同的临床表型相关。HLA-B*2705阳性AS患者有更高的虹膜炎发生风险，而HLA-B*2704和HLA-B*2715阳性的AS患者有更低的起病年龄。.二. 探讨 HLA-B*2715相关的内质网应激及细胞因子变化在AS致病中的作用. 1. 慢病毒载体的构建：首先通过化学合成法合成HLA-B*2715全长cDNA，再设计一对突变引物，采用每次添加一条引物的两轮PCR反应将pUC57-B2704质粒突变成pUC57-B2706质粒。. 2.HLA-B2715稳定细胞系建立：构建了三个慢病毒载体质粒以及空载体质粒和pLP1，pLP2和pLP/VSVG质粒分别转化DH5α，提取高质量的无内毒素质粒。. 3.HLA-B*2715与AS致病相关的内质网应激和致病相关因子的变化研究：Real-Time PCR检测IL-1β，IL-6，IL-8，IL-12和TNF-α的mRNA表达。应用液相芯片技术检测所有细胞培养上清中五种细胞因子的浓度。. 结果和结论：HLA-B*2715蛋白可能异常折叠从而导致了内质网应激；2.HLA-B*2715阳性细胞发生内质网应激后引发了AS相关的致病因子IL-8和TNF-α变化，其相关的致病机制值得进一步研究。

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