硬脂酰辅酶A脱氢酶1在鹅肥肝形成过程中的功能研究

本研究以朗德鹅为素材，采用RT-PCR和RACE技术获得了朗德鹅SCD1基因的完整cDNA序列，包含1083 bp的CDS序列，78 bp的5’UTR，2.1 kb的3’UTR，包含6个外显子，编码360个氨基酸；预测其蛋白质分子量为40967.2 Da，等电点为8.8，为亲水性蛋白，存在四个跨膜区域。通过PCR-SSCP技术检测到SCD1基因外显子和非编码区上共6个SNPs，在朗德鹅外显子2的132 bp处存在T/C碱基替换，产生了3种基因型，各基因型间产肝性能差异不显著。3’UTR区域检测到5个SNPs，共形成5种基因型组合，其中H1H1的肝体比和肝重均大于其它4种单倍型组合，可以作为基因标记进行高产肝个体的选择。利用高能玉米对70日龄朗德鹅进行填饲，western blotting技术检测朗德鹅肝脏中SCD1基因编码蛋白水平发现，填饲后SCD1基因编码的蛋白水平增加。利用“胶原酶消化法”从朗德鹅胚中分离出高活性、高纯度的原代成熟肝脏细胞，建立鹅胚原代肝细胞培养体系。一定剂量果糖、胰岛素单独添加以及协同作用均能增加鹅原代培养肝细胞SCD1基因表达水平。通过构建SCD1基因真核表达载体转染鹅胚原代肝细胞，荧光定量PCR检测SCD1基因mRNA水平显著升高，同时细胞中脂类代谢相关基因SREBP-1基因表达水平也显著升高。根据SCD1的mRNA序列设计合成3对小双链干扰RNA（siRNA）以及阴性对照，转染鹅原代肝细胞，RNA干扰SCD1基因表达后，与脂肪合成相关的基因FAS、ACC表达下调，肝细胞外液的脂类代谢产物减少，反映了肝细胞脂类合成减少。研究结果表明SCD1基因能促进肝脏脂肪合成，在鹅肥肝形成过程中起重要作用。