二亚硝基哌嗪(DNP)调控AGR2表达参与鼻咽癌转移的分子机制研究
结题报告
批准号:
81372282
项目类别:
面上项目
资助金额:
75.0 万元
负责人:
唐发清
依托单位:
学科分类:
H1809.肿瘤复发与转移
结题年份:
2017
批准年份:
2013
项目状态:
已结题
项目参与者:
邹飞雁、刘谦虚、李跃进、谭功军、彭正科、卢金平、feng zhu
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中文摘要
鼻咽癌(NPC)高转移严重影响NPC有效治疗,前期研究发现DNP诱导NPC转移伴AGR2高表达,分子模拟显示DNP与Agr2启动子结合,阻断Agr2基因,Cathepsin B、D表达下降,细胞转移降低。我们推断:DNP上调AGR2介导Cathepsin B、D表达,促进NPC转移。本项目拟进行: ①分析DNP诱导NPC细胞转移及AGR2、Cathepsin B、D表达;②分析沉默Agr2对DNP诱导Cathepsin B、D表达和细胞转移的影响及沉默Cathepsin b,d基因是否抑制DNP诱导细胞转移;③DNP对Agr2表达调控启动子分析;④动物实验分析Agr2、Cathepsin b或d 沉默DNP介导的细胞转移。⑤分析NPC患者DNP、AGR2与肿瘤转移的关系。阐明DNP通过 AGR2/Cathepsin B、D参与NPC转移的分子机制,为NPC转移分子机理研究提供科学理论依据
英文摘要
The metastasis of nasopharyngeal carcinoma (NPC) impact NPC therapy. Our previous works found that Dinitrosoperazine (DNP) induces NPC metastasis with a high expression of Anterior gradient-2 (AGR2),molecule simulation showed that DNP interacts with the promoter of Agr2 gene, while Cathepsin B,D expression and cell metastasis significantly decrease while Agr2 blocked. We speculate that DNP may up-regulate AGR2, mediate Cathepsin B、D expression, and promote NPC metastasis. In this study, ① AGR2,Cathepsin B and D expressions are detected in NPC cells with DNP treatment and its metastasis is also measured. ② Cathepsin B,D expressions are detected in the Agr2 -blocked NPC cells and its metastasis is measured after DNP treatment. The cell metastasis is also detected when Cathepsin b or d gene blocked. ③ Agr2 gene promoter activity is analyzed followed DNP treatment. ④ When Agr2、Cathepsin b or d gene is blocked, DNP-mediated cell metastases are tested using nude mice. ⑤The relationships of DNP concentration, AGR2 level and NPC metastasis are analyzed in NPC patients. We will prove DNP-AGR2-Cathepsin B、D-metastasis signal pathway. This will provides a novel clue for NPC metastasis research.
鼻咽癌(NPC)具有高转移、高复发的临床特征,给鼻咽癌的有效治疗带来极大的难题。本项目采用分子模拟、基因表达和基因干扰等分子生物技术研究DNP参与鼻咽癌转移的机制,获得以下的研究成果:1)AGR2表达在鼻咽、原发部位鼻咽癌组织和淋巴结转移组织逐步增高,AGR2表达与CTSB、CTSD呈正相关。鼻咽癌转移患者尿DNP高于无转移者和健康人群,且DNP水平与转移密切相关。2)采用低转移鼻咽癌细胞株6-10B细胞作细胞模型, 分析DNP对细胞AGR2、CTSB和CTSD表达的影响,发现DNP促进AGR2、CTSB和CTSD表达,且呈浓度和作用时间依赖性。3)用Boyden-chamber assay分析细胞侵袭移动能力,Western-blotting 检测AGR2、Cathepsin B、D表达。结果发现DNP促进6-10B 细胞AGR2表达,促进侵袭移动。4)分子模拟推算DNP与调控元件XRE可能结合的化学键能,结果发现DNP与XRE1、2、3结合。5)根据分子模拟结果, 构建含不同XREs的AGR2基因启动子质粒。用QuikChange Ⅱsite-directed mutagenesis构建pcDNA3.1-AGR2 promoter突变体。核素自显影,发现DNP与含XRE的质粒DNA结合。6)荧光酶报导基因活性分析XRE对DNP诱导AGR2基因转录活性的影响。结果发现DNP通过XRE诱导AGR2基因表达。7)Western-blotting 分析CTSB、CTS D、MMP9、VEGF表达; Real-time PCR分析CTS B、CTSD基因表达;Flourimetric Innozenmy方法检测CTSB、CTSD酶活性。结果发现, DNP诱导鼻咽癌细胞CTSB、CTSD表达,其表达与AGR2的相关性。8)动物实验发现CTSB、CTSD在DNP诱导鼻咽癌细胞侵袭移动中起促进作用。这为进一步研究鼻咽癌转移的分子机制提供了新的思路。在本课题资助下,发表学术论文8篇,会议论文6篇,培养研究生8名,其中博士4名,硕士4名。
期刊论文列表
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
DOI:10.18632/oncotarget.6875
发表时间:2016-02-09
期刊:Oncotarget
影响因子:--
作者:Lu J;Zhang ZL;Huang D;Tang N;Li Y;Peng Z;Lu C;Dong Z;Tang F
通讯作者:Tang F
Krüppel-like factor 17, a novel tumor suppressor: its low expression is involved in cancer metastasis.
新型抑癌因子Kruppel样因子17:其低表达参与癌症转移
DOI:10.1007/s13277-015-4588-3
发表时间:2016-02
期刊:Tumour biology : the journal of the International Society for Oncodevelopmental Biology and Medicine
影响因子:--
作者:Zhou S;Tang X;Tang F
通讯作者:Tang F
DOI:10.1186/s12885-016-2283-4
发表时间:2016-03-19
期刊:BMC cancer
影响因子:3.8
作者:Tan G;Liu Q;Tang X;Kang T;Li Y;Lu J;Zhao X;Tang F
通讯作者:Tang F
DOI:10.1007/s13277-014-2847-3
发表时间:2015-01
期刊:TUMOR BIOLOGY
影响因子:--
作者:Tan, Gongjun;Tang, Xiaowei;Tang, Faqing
通讯作者:Tang, Faqing
DOI:10.1371/journal.pone.0092081
发表时间:2014
期刊:PloS one
影响因子:3.7
作者:Li Y;Lu J;Peng Z;Tan G;Liu N;Huang D;Zhang Z;Duan C;Tang X;Tang F
通讯作者:Tang F
化学致癌物DNP活化超增强子调控MICAL2促进鼻咽癌转移的分子机制研究
  • 批准号:
    81872226
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    57.0万元
  • 批准年份:
    2018
  • 负责人:
    唐发清
  • 依托单位:
二亚硝基哌嗪(DNP)上调HSP70-2诱导鼻咽细胞癌变的分子机制研究
  • 批准号:
    30973400
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    31.0万元
  • 批准年份:
    2009
  • 负责人:
    唐发清
  • 依托单位:
采用分子动态模拟研究益气解毒颗粒有效成分抗鼻咽癌变的分子机制
  • 批准号:
    30572455
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    26.0万元
  • 批准年份:
    2005
  • 负责人:
    唐发清
  • 依托单位:
用蛋白组学方法研究益气解毒片阻断鼻咽癌变的分子机理
  • 批准号:
    30171174
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    17.0万元
  • 批准年份:
    2001
  • 负责人:
    唐发清
  • 依托单位:
益气解毒片对鼻咽细胞癌变端粒酶行为的影响
  • 批准号:
    39770933
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    12.0万元
  • 批准年份:
    1997
  • 负责人:
    唐发清
  • 依托单位:
国内基金
海外基金