TGFβ信号通路介导miR-206对婴幼儿血管瘤病程发展的影响

Infantile hemangiomas(IH) are the most common benigeous involution in infants.IH stem cells were supposed to be the source of tumor.With high activity of VEGF signal pathway,the na?ve endothlial cells proliferated rapidly during proliferation period.But there is little known about the mechanism of spontaneous involution .Our preexperiment show that the level of miR-206 and Smad4 is different in different period of IH,but the relation between them and involution of IH still need deep investigation.Therefore,we proposed that TGFβ signal pathway play significant role in the involution of IH throurh miR-206 by induced fibrosis and transforming.To demonstrate this hypothesis,we will study on the IH stem cells and the animal model based on it,and try to prove the involution mechanism on the level of molecules，cells,tissues and the vivo by real timePCR，western blot and RNAi. It will be the foundation to reveal the involution mechanism of IH from a new viewpoint and will provide a new way to treatment the IH.

婴幼儿血管瘤(IH)具有快速增生和自发消退趋势, 病程独特,是婴幼儿最常见良性肿瘤，目前病因不清病程机制不明。研究发现异常VEGF信号通路调节的幼稚型血管内皮细胞的大量增殖可能是增生期的主要分子机制,IH干细胞(HemSCs)可能是IH的来源细胞， 细胞凋亡和转化可能在其消退过程中发挥重要作用，但具体机制仍知之甚少,TGFβ及其下游miR-206在其他肿瘤病程发展及EnMT中发挥重要作用,但对HemSCs作用不明。我们预实验发现IH病程中Smad4和miR-206表达差异明显，且miR-206对内皮细胞功能具有重要调节作用。为此，我们提出假设：TGFβ信号通路介导miR-206可能通过促进HemSCs凋亡和细胞转化在IH消退中发挥重要作用。为验证假说我们拟确定病程中TGFβ及miR-206的表达丰度,通过慢病毒转染研究TGFβ及miR-206对HemSCs功能的影响,构建动物模型验证假说。

项目背景：婴幼儿血管瘤发病率高，是婴幼儿最常见的良性肿瘤，病程独特，机制不明，瘤体最后往往在消退完成期残留脂肪和大量纤维组织，对病程发展中出现的这种奇特现象的研究有助于为疾病治疗提供理论基础。.主要研究内容：本课题组对增殖期婴幼儿血管瘤标本内的干细胞进行了分离、培养和鉴定。构建了婴幼儿血管瘤来源干细胞has-miR-206过表达稳转细胞株，完成了TGFβ1对miR-206不同表达水平的HemSCs细胞功能的影响的检测,并对TGFβ信号通路及EMT相关mRNA及蛋白表达的影响进行了研究。完成了hsa-miR-206 对HemSCs构建动物模型体内血管瘤的成瘤及消退作用的影响的研究.重要结果及关键数据：通过本课题组的实验研究成功分离获取了HemSCs细胞，并完成了细胞的鉴定及传代培养工作。成功构建hsa-miR-206干扰慢病毒，并建立HemSCs细胞hsa-miR-206过表达稳转细胞体系。实验研究发现hsa-miR-206对增殖期婴幼儿血管瘤干细胞具有明显的促进增殖、抑制凋亡、抑制迁移和侵袭的能力。TGFβ1对增殖期婴幼儿血管瘤干细胞的hsa-miR-206表达具有抑制作用，TGFβ1对hsa-miR-206不同表达水平的婴幼儿血管瘤干细胞均存在抑制增殖，促进凋亡以及抑制迁移和侵袭的能力，hsa-miR-206使HemSCs处于G1期细胞比例增加，TGFβ1则促使处于G2/S期的HemSCs比例增加。而hsa-miR-206对TGFβ信号通路的共同调节因子SMAD4具有明显的抑制作用，TGFβ1能够减轻hsa-miR-206对SMAD4的抑制作用。hsa-miR-206能够促进婴幼儿血管瘤干细胞E-Cadherin的mRNA及蛋白表达，这种作用可以被TGFβ1逆转。TGFβ1对hsa-miR-206不同表达水平的HemSCs均具有促进β-Cantenin、N-Cadherin和Vimentin的mRNA和蛋白水平的表达，而对α-SMA、Collagen-1则无明显改变。细胞水平表达的hsa-miR-206水平较低，采用慢病毒转染干扰hsa-miR-206表达所导致的核酸及蛋白水平的改变并不明显。但在细胞水平可明显观察到细胞增殖能力减弱，早期凋亡增加。.科学意义：通过本课题的研究，确定TGFβ1有明显促进HemSCs的EMT作用，且不依赖于SMAD4途径

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