益生性乳杆菌黏附作用的分子机制研究

以实验室自主分离和鉴定的乳杆菌作为研究对象，通过对其与黏附相关表面疏水性、自聚力、共聚力以及与Caco-2的粘附能力等的分析，从中筛选出了高黏附能力菌株。采用蛋白质组学对与黏附相关的细胞表面蛋白进行了鉴定，确定益生乳杆菌的表面蛋白分子标记。克隆了乳杆菌参与黏附作用的细胞表面关键蛋白基因GAPDH，构建重组表达载体并异源表达获得黏附相关的重组GAPDH蛋白，SDS-PAGE分析证明重组GAPDH蛋白分子量约为40 kDa。获得纯化的GAPDH重组蛋白。采用体外Caco-2细胞黏附试验验证，GAPDH重组蛋白能够实现黏附在Caco-2单层细胞的表面、形成占位，从而阻碍了致病菌对Caco-2细胞的黏附。利用动物实验模型验证植物乳杆菌C88在小鼠盲肠定殖的数量最高，其次是结肠，回肠中最少。利用激光共聚焦显微镜观察乳杆菌C88在小鼠肠黏膜表面呈弥散状分布，形成生物性占位。且植物乳杆菌C88具有调节肠道菌群的作用。本研究确定了与粘附相关表面蛋白的功能结构域及宿主表面特异受体，对于进一步揭示乳酸菌粘附作用机理提供了重要的科学依据。